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目的:祖卡木颗粒是维吾尔医学中治疗感冒的代表性方剂,具有调节异常气质,清热、发汗、通窍的功效,用于治疗感冒咳嗽、发热无汗、咽喉肿痛、鼻塞流涕等。尽管祖卡木颗粒的临床疗效已得到证实,但其具体作用机制目前尚不明确。本研究采用经典的镇痛抗炎模型,考察其镇痛抗炎的药效作用,并结合网络药理学及药理学实验着重研究其抗炎机制,为临床用药提供实验依据。方法:通过小鼠热板法及醋酸扭体法考察维吾尔药祖卡木颗粒的镇痛药效;通过脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肺损伤及二甲苯诱导的小鼠耳肿胀炎症模型观察祖卡木颗粒的抗炎药效;通过顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用(HS-SPME-GC-MS)技术分析祖卡木颗粒中的挥发性成分,结合网络药理学各大数据库的使用预测祖卡木颗粒抗炎的物质基础及其潜在的作用机制;为进一步探讨祖卡木颗粒抑制二甲苯及LPS介导炎症反应的分子机制,在二甲苯致小鼠耳肿胀模型与LPS致大鼠急性肺损伤模型药效学基础上,通过酶联免疫吸附法(ELISA)、蛋白质印记法(WB)开展其对炎症丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、核转录因子(NF-κB)信号传导途径及相关炎症介质的影响等作用机理方面的深入研究。结果:(1)镇痛药效:祖卡木颗粒对热板刺激疼痛反应及醋酸溶液的腹腔刺激疼痛反应均有显著抑制作用,在给药后60分钟抑制疼痛作用最大,且痛阈值随着剂量增加,与对照组相比,有显著性差异(P<0.05)。(2)炎性病理损伤:病理评估表明祖卡木颗粒预处理后可显著改善二甲苯诱导耳肿胀模型小鼠出现的组织充血、水肿、横纹肌纤维排列紊乱、大量炎性细胞浸润等炎症反应;以及LPS诱导急性肺损伤模型出现的肺泡壁明显增厚、肺泡大小不均且明显变小、大量炎性细胞浸润等炎症反应。且随着祖卡木给药剂量的增加,这种现象逐渐减少,其中高剂量组改善耳组织及肺组织的结构损伤以及降低炎性细胞浸润效果最佳。(3)网络药理学:祖卡木颗粒中共鉴定出47个挥发性成分,筛选出L-薄荷醇、麝香草酚、子丁香酚等17个生物活性成分,预测到44个抗炎靶点,涉及MAPK信号通路、NF-κB信号通路和花生四烯酸代谢等20条炎症相关通路。(4)炎症因子含量:在二甲苯诱导的小鼠耳肿胀模型中,与正常组相比,模型组小鼠耳组织中促炎细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达水平显著增加(P<0.001)。与模型组相比,地塞米松及祖卡木各剂量组促炎细胞因子的含量显著降低(P<0.01),且祖卡木组呈剂量依赖性抑制,给药组和正常对照组之间没有显著性差异(P>0.05)。在LPS诱导的大鼠急性肺损伤模型中,与正常组相比,模型组大鼠肺泡灌洗液中IL-6、IL-1β和TNF-α的含量急剧增多(P<0.001);与模型组相比,地塞米松及祖卡木各剂量组炎症因子水平均显示不同程度的下降(P<0.05)。(5)MAPK信号通路家族蛋白的表达:二甲苯诱导的小鼠耳肿胀模型中,与正常组相比,模型组p-P38,p-ERK,p-JNK表达量明显升高(P<0.001);与模型组相比,地塞米松及祖卡木各剂量组p-P38,p-ERK,p-JNK水平显著降低(P<0.001,P<0.05)。在LPS诱导的急性肺损伤模型中,大鼠肺组织中P38、ERK和JNK磷酸化水平的变化趋势与二甲苯诱导小鼠耳肿胀模型中的趋势基本一致。(6)NF-κB信号通路相关蛋白的表达:在LPS诱导的急性肺损伤模型中,与正常组相比,LPS可引起NF-κB P65在肺组织的磷酸化;与模型组比较,地塞米松及祖卡木各剂量组可逆转这些肺损伤表现。此外,模型组中COX-2和i NOS的表达显著增强,而地塞米松及祖卡木各剂量组可不同程度的抑制其表达量。结论:(1)镇痛作用:与模型组相比,祖卡木各剂量组均可以显著抑制热板刺激的疼痛反应和醋酸所致的小鼠扭体反应,表明祖卡木颗粒是针对于物理和化学疼痛的有效镇痛药。(2)抗炎作用:与模型组相比,不同剂量祖卡木能显著改善小鼠耳组织和大鼠肺组织的炎性病理损伤,降低小鼠耳组织和大鼠肺泡灌洗液中的炎症因子分泌水平,并抑制耳组织及肺组织中MAPK信号通路家族蛋白P38、ERK和JNK的磷酸化,大鼠肺组织中NF-κB信号通路相关蛋白NF-κB P65的磷酸化及其下游靶标基因COX-2、i NOS的表达。且祖卡木颗粒高剂量组的改善效果和抑制效应最佳,表明它具有一定的抗炎活性,可能是通过抑制相关蛋白的磷酸化或表达而阻止MAPK和NF-κB信号传导途径的激活来调节炎症反应,从而对二甲苯所致耳肿胀的炎症小鼠和脂多糖所致的急性肺损伤大鼠产生治疗作用。另外,将HS-SPME-GC-MS获得的化合物通过多个数据库的筛选和汇总,并在线构建网络的方法研究了祖卡木颗粒多成分、多靶点、多通路的协同效应,从而预测了祖卡木颗粒发挥抗炎作用的物质基础和作用机制,同时与药理学实验验证相结合,提供了一种可靠的方法来揭示祖卡木颗粒复杂的作用机制。总之,祖卡木颗粒是对抗急性上呼吸道感染的有效治疗剂,具有镇痛、抗炎的药理作用以缓解咽痛、头痛、鼻塞流涕等症状,且镇痛、抗炎作用机理清晰,以期更好地为临床医疗服务。