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目的：为阐明p57kip2基因异常与人肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)发生发展的关系,本文拟检测三种与p57kip2相关的microRNA的表达,以分析microRNA与p57kip2mRNA和蛋白表达的调控关系,并探讨p57kip2基因异常在肝癌发生发展中的可能机制。方法：选取肝细胞肝癌和相应癌周组织各20例,正常肝组织5例,采用SYBR GreenI实时荧光定量PCR技术检测miR-221、miR-222、miR-92b的表达,并用测序方法进行了验证。相同的方法检测了p57kip2 mRNA的转录水平,并采用原位杂交技术进一步验证p57kip2 mRNA的表达和细胞定位。采用免疫组化技术检测P57kip2蛋白的表达。对三种miRNA与p57kip2mRNA和蛋白表达之间的关系进行分析。结果：1. qPCR结果：与正常肝组织相比,miR-221在85%(17/20)的肝癌和80%(16/20)癌周组织中表达上调一倍以上；miR-222在90%(18/20)的肝癌和70%(14/20)癌周组织中表达上调一倍以上；miR-92b在90%(18/20)的肝癌和60%(12/20)癌周组织中表达上调一倍以上。其中miR-221/222在肝癌组上调幅度显著高于癌周组,有显著的统计学意义(miR-221：t=2.728,p=0.014；miR-222：t=2.613,p=0.018),并且低分化癌中表达显著高于高分化癌(miR-221：z=-2.675,p=0.004<0.017；miR-222：z=-2.548,p=0.011<0.017)。miR-92b在肝癌和癌周组中的表达无统计学意义(t=0.027,p=0.987>0.05),在不同分化癌组织中表达也无差异(z=-1.567,p=0.311>0.017)。p57kip2 mRNA在70%(14/20)的肝癌、90%(18/20)癌周组织和60%(3/5)正常肝组织中有表达,与正常肝组织相比,p57kip2 mRNA在有表达的肝癌和癌周样本中分别有85.7%(12/14)和44.4%(8/18)转录水平下调,其中肝癌组与癌周相比有统计学意义(t=2.167,p=0.043<0.05),低分化肝癌组中p57kip2mRNA转录水平显著下调(z=-2.932,p=0.003<0.017)。对三种miRNA与P57kip2mRNA进行spearman相关分析,miR-221：肝癌组r=0.068,P=0.068>0.05；癌周组r=-0.266,P=0.258>0.05。miR-222：肝癌组r=0.327,P=0.159>0.05；癌周组r=-0.437,P=0.054>0.05；miR-92b：肝癌组r=0.229,P=0.332>0.05；癌周组r=-0.485,P=0.030<0.05,提示三种miRNA与p57kip2mRNA的转录水平大多数无统计学相关关系。2.原位分子杂交检测结果：p57kip2 mRNA在正常肝组织未见表达,肝癌组与癌周组表达阳性率分别为55%(11/20)和90%(18/20),在不同分化程度肝癌组织中的阳性表达率分别为高分化组75%(3/4),中分化42%(5/12),低分化0%(0/4)。在肝癌组与癌周组(p=0.031<0.05),肝癌组与正常组(p=0.046<0.05),癌周组与正常组之间(p=0.000<0.05)表达均有统计学意义。相关性分析显示：肝癌组与癌周组原位杂交表达情况与qPCR结果显著正相关(r=0.495,p=0.001)。3.免疫组化结果：P57kip2蛋白在正常肝组织未见表达,肝癌组织和癌周组织表达阳性率分别为45%(9/20)和80%(16/20),在肝癌组与癌周组(p=0.048<0.05)、肝癌组与正常组之间(p=0.046<0.05)表达均有统计学意义,癌周组与正常组之间表达无统计学意义(p=0.549>0.05)。P57kip2蛋白在不同分化程度肝癌中表达有统计学意义(X2=6.195,p=0.045<0.05),低分化组中表达降低(p=0.047<0.05)。4.相关性分析：qPCR检测p57kip2mRNA转录水平与P57kip2蛋白表达作spearman相关分析：肝癌组：相关系数r=-0.168,P=0.478>0.05；癌周组：相关系数r=-0.033,P=0.892>0.05。原位杂交检测的p57kip2mRNA结果与P57kip2蛋白表达作相关性分析：肝癌组：相关系数r=-0.192,P=0.418>0.05；癌周组：相关系数r=0.250,P=0.288>0.05,提示在肝癌和癌周组织,p57kip2mRNA转录水平与P57kip2蛋白表达无统计学相关关系。三种miRNA和P57kip2蛋白表达spearman相关性分析显示：肝癌组miR-221相关系数r=-0.584,P=0.007<0.01；miR-222相关系数r=-0.497,P=0.026<0.05；miR-92b相关系数r=-0.331,P=0.153>0.05,提示miR-221/222与p57kip2蛋白表达水平显著负相关,而miR-92b无统计学相关关系。癌周组无统计学相关关系。结论：1. p57kip2 mRNA和蛋白在肝癌中表达异常,p57kip2的变化方式与抑癌基因的作用方式相似。2.miR221/222在肝癌组织表达明显上调,表现为负性调控P57kip2蛋白的作用；但在癌周组织中未见明显调控作用,其生物学意义有待进一步研究。3.miR221/222均未见上调或下调p57kip2mRNA的作用。4.miR-92b在肝癌和癌周肝组织中的表达均明显升高,但均无明显上调或下调p57kip2的作用,可能在肝癌中不具有调控p57kip2表达的作用。