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流行性感冒是人类至今不能有效控制的传染病之一,每次流行都给人类的健康和经济造成重大的损失。虽然有抗病毒药物,但可能诱导耐药株出现,不适合大范围长时间来应对流行性感冒。目前接种疫苗仍被认为是预防流感的最好方法。传统的流感疫苗以鸡胚为培养基质,生产过程容易受到微生物的污染、不能大规模生产、对流感大流行应急能力差等,因此基于动物细胞为基质生产的流感疫苗成为疫苗发展的重要方向。非洲绿猴肾细胞系Vero是世界卫生组织WHO推荐的人用疫苗生产基质,目前已用于多种疫苗的生产,其安全性已得到认证。在流感大流行时,如何提高细胞培养技术水平以提高流感疫苗的产量和生产效率及病毒的培养条件成为动物细胞大规模培养及疫苗生产的目标和竞争核心。动物细胞无血清培养基的开发,将实现流感疫苗高效率、低成本的生产,成为流感疫苗开发的重要环节。因此,本文借助统计学方法开发适用于Vero细胞生长的无血清培养基。首先,本文通过连续运用单因素实验—Plackett-Burman实验—最陡爬坡实验—中心组合实验5种统计学方法,建立了Vero细胞无血清培养基快速高效的开发技术。通过单因素实验设计确定了胰岛素、转铁蛋白、高密度脂蛋白、牛血清白蛋白、表皮生长因子、透明质酸和亚硒酸钠在后续实验中的添加浓度,考察的浓度范围分别为胰岛素3-6ug/mL,转铁蛋白7.5-15ug/mL、高密度脂蛋白10-2Oug/mL、牛血清白蛋白2-4mg/mL、表皮生长因子50-100ng/mL、透明质酸15-30mg/mL、亚硒酸钠4-8mmol/mL;进一步通过Plackett-Burman实验考察胰岛素、转铁蛋白、高密度脂蛋白、牛血清白蛋白、表皮生长因子、透明质酸和亚硒酸钠7种添加物对Vero细胞生长的影响作用大小,方差分析结果表明胰岛素、牛血清白蛋白对Vero细胞的生长有显著正影响作用(p<0.05),转铁蛋白、表皮生长因子、透明质酸有正影响作用(p>0.05),而高密度脂蛋白和亚硒酸钠对细胞生长存在负影响作用；又通过最陡爬坡实验拓宽胰岛素、转铁蛋白、牛血清白蛋白的浓度范围,3种添加物的浓度分别为5.4ug/mL,13.8ug/mL,3.6mg/mL时,测定的OD490值最大；最后通过中心组合实验确定胰岛素、转铁蛋白和牛血清白蛋白的最佳浓度条件,分别为胰岛素5.625ug/mL,转铁蛋白14.034ug/mL,牛血清白蛋白3.92mg/mL,按此条件配制的无血清培养基可支持Vero细胞的连续培养。随后,利用Vero细胞无血清培养培养体系,对Vero细胞培养H5N1流感病毒过程的MOI及TPCK-胰蛋白酶的添加量进行优化,自配无血清培养体系培养H5N1流感病毒的条件为：接种量MOI为0.001,TPCK-胰蛋白酶的添加量1ug/mL,并且每隔24h补加初始浓度的TPCK-胰蛋白酶。在优化的H5N1流感病毒生产条件下,自配无血清培养基和Gibco商品化无血清培养基培养H5N1流感病毒的的HA及感染性滴度没有显著性差别,但都低于完全培养基培养。完全培养基、自配无血清培养基和Gibco商品化无血清培养基三种培养基培养出的病毒HA滴度分别为：512HAU/50uL、277.3HAU/50uL、149.3HAU/50uL,感染性滴度分别为：108.375±0.25TCID50/mL、107.75±0.06TCID5o/mL 和 107.32±0.12TCID50/mL。表明自配无血清培养基培养体系适于流感病毒疫苗的生产,但和完全培养基培养体系相比仍有一定的差别。目前,仍不能应用于规模化流感疫苗的生产,需继续对此无血清培养基的配方继续进行优化。