论文部分内容阅读
目的：考察自制的阳离子脂质体作为载体，在小鼠体内递送DNA及RNA的效果及其体内安全性。方法：（1）以荧光素酶为目的基因，分别以自制的8种阳离子脂质体为载体，对携带荧光素酶基因的质粒pGFP-N2在小鼠体内进行转染。通过Western Blotting检测转染后小鼠肺和肝脏中荧光素酶的表达，评价阳离子脂质体在小鼠体内递送DNA的效果。（2）以自制的4种阳离子脂质体为载体转染小鼠，对载脂蛋白B（Apoplipoprotein B，Apo B）进行体内RNA干扰。RT-PCR检测小鼠肝脏中ApoBmRNA的表达，ELISA、Western Blotting检测小鼠肝脏及血浆中Apo B蛋白的表达，评价阳离子脂质体在小鼠体内递送siRNA的效果。（3）在进行体内转染的同时通过考察小鼠的体重变化、内脏变化、死亡率等指标评价所用阳离子脂质体的体内安全性。结果：（1）以自制的8种阳离子脂质体9、10、17、19、20、21、22、CD01为载体进行体内DNA转染，通过Western Blotting检测到转染组小鼠肝脏和肺中有荧光素酶蛋白的表达，表明所考察的阳离子脂质体均有体内递送DNA的作用，且自制的阳离子脂质体和商品脂质体Lipofectamine2000效果相近。壳聚糖作为促进剂可以帮助脂质体在体内将质粒运送至靶器官和靶细胞。（2）分别以自制脂质体9、21、CTA、CPA为载体进行体内RNA干扰，通过Western Blotting及RT-PCR的方法检测到CTA及CPA干扰组的小鼠ApoB在mRNA及蛋白水平的表达明显低于对照组，表明这两种阳离子脂质体可在体内将siRNA递送至靶部位并使其发挥基因沉默作用。壳聚糖对RNA干扰效果有促进作用。（3）所考察的阳离子脂质体-基因复合物尾静脉注射会对小鼠的健康状态产生影响，与Lipofectamine2000相比毒性较低。结论：实验考察的阳离子脂质体具有体内递送DNA及RNA的作用；有一定的毒性，但低于商品脂质体Lipofectamine2000，具有进一步研究和开发的价值。