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丝状真菌是一类常见的真核微生物,能够产生各种各样具有不同生物学活性的次级代谢产物,如真菌毒素、抗生素和色素等。已有研究证实丝状真菌的次级代谢与其形态发育在G-蛋白信号转导途径的调控下紧密的联系在一起。在这一调控途径中,全局性调控因子VeA在协调真菌形态发育和次级代谢中起着重要的作用。拟茎点霉G818是稀有的海洋内生丝状真菌,其代谢途径特殊,能够产生结构独特、骨架新颖、活性多样的次级代谢产物。真菌环氧二烯(MED)和去乙酰基真菌环氧二烯(DAM)是其产生的一类具有较好抗肿瘤活性和AMPK激活活性的含有氧桥的二烯化合物。前期已通过基因组改组技术获得DAM产量提高约300倍的高产菌株G818,并比较了DAM高产菌株与野生型菌株A123的转录组差异,获得一系列差异序列,以其中一条PKS序列为探针,从基因组中克隆了与DAM生物合成相关的基因簇。本文将克隆全局性调控因子VeA,比较其在DAM产生菌形态发育与次级代谢产物DAM合成中的调控作用。首先,根据已报道的真菌VeA同源蛋白序列,选取N端保守区域设计简并引物,采用常规PCR和LA-PCR技术首次从DAM产生菌拟茎点霉属中克隆得到veA基因。克隆得到的veA基因ORF长度为1210bp,存在一个大小为64bp的内含子,能够编码381个氨基酸。然后,对不同培养条件下DAM高低产菌株在不同培养周期的菌落形态、veA基因的表达情况、以及DAM的生物合成相关基因表达情况进行分析比较,发现在光照条件下veA基因的表达水平下调,菌株的气生菌丝量明显减少,色素加深,并形成在黑暗培养条件下没有观察到的菌丝结核,但是DAM的产量没有明显的改变；同时根据veA基因和DAM合成相关基因的表达情况,发现veA基因是DAM生物合成的正向调控因子,在黑暗条件下随着高产菌株veA基因表达量的提高,DAM生物合成关键基因pks表达开始启动,DAM的产量不断增加。此外,以干扰载体pSilent-1质粒为元件,构建veA基因的干扰菌株。通过检测veA干扰突变菌株和对照菌株中veA基因的表达情况及DAM的产量,发现随着veA基因表达量的下调,DAM的产量也受到不同程度的抑制,表明veA基因在一定程度上促进了DAM的合成。拟茎点霉veA基因的成功克隆以及其RNA干扰和基因表达情况的初步研究,为VeA的功能研究及DAM生物合成途径的探索奠定基础。