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该研究采用RT-PCR一步法扩增出人膜结合型TNF基因片段,构建了重组克隆载体pUC-TNF并进行测序鉴定.然后通过亚克构建了GST-TNF融合基因,建立了重组膜型TNF的GST融合表达及纯化优势,为进一步定点突变,设计高效低毒的非分泌性膜结合TNF,用于肿瘤的基因治疗打下了良好的基础.研究工作包括以下几个方面:1.活化单核细胞的总RNA提取及逆转录PCR扩增TNF基因;2.目的基因在质粒pUC19中的定向克隆及序列测定;3.原核表达载体pGEX-4T-2中GST-TNF融合基因的构建.