UVB对人上皮细胞损伤作用的实验研究

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目的:  探讨中波紫外线(UVB)对人上皮细胞(人胃癌细胞SGC-7901、人永生化表皮细胞)的损伤作用,建立UVB损伤人上皮细胞的模型,探讨损伤机理,为世居高原人群的罕见病高发提供病因研究线索。  方法:  体外培养人胃癌细胞SGC-7901、人永生化表皮细胞HaCaT两种上皮细胞,然后分为四组,一组对照组,另外三组分别是低、中、高剂量照射组。其中人胃癌细胞的照射剂量6mJ/cm2、12mJ/cm2、18mJ/cm2;HaCaT细胞的照射剂量为10mJ/cm2、30mJ/cm2、60mJ/cm2紫外线照射组,每组5个平行样本。照射后12h进行检测。检测指标有人胃癌细胞SGC-7901增殖活性(MTT法),人胃癌细胞SGC-7901形态(光学显微镜下观察),人胃癌细胞SGC-7901凋亡形态(荧光显微镜),人永生化表皮细胞凋亡率(流式细胞术FCM),人永生化表皮细胞DNA损伤(单细胞凝胶电泳实验)。  结果:  1、UVB照射人胃癌细胞SGC-7901后可使其吸光度值下降,对照组、6、12、18mJ/cm2紫外线照射组细胞吸光度值分别为0.671±0.179,0.318±0.009,0.257±0.201,0.197±0.156,各组间差异有统计学意义(p<0.05)。  2、UVB照射人胃癌细胞SGC-7901后,在形态学上可见细胞形态肿胀变圆,失去与邻近的细胞的连接,细胞出现脱落,且细胞损伤程度与照射剂量有剂量依赖性。  3、UVB照射可诱导人胃癌细胞SGC-7901发生凋亡。  4、UVB照射人永生化表皮细胞可诱导其发生凋亡,且剂量越大细胞凋亡率越高。对照组、10、30、60mJ/cm2紫外线照射组细胞早期凋亡率分别为1.2±0.14,2.23±0.37,4.13±0.29,5.97±0.17,晚期凋亡率分别为2±0.13,7.63±0.52,23.36±0.98,40.46±1.39,各组间差异有统计学意义(p<0.05)。  5、UVB照射人永生化表皮细胞可使其细胞尾矩和Olive尾矩增大,且照射剂量越大,尾矩和Olive尾矩越大。对照组、10、30、60mJ/cm2紫外线照射组细胞DNA尾矩分别为0.13±0.25,21.78±2.31,53.48±5.66,79.16±7.47,各组间差异有统计学意义(p<0.05),Olive尾矩分别为0.32±0.47,16.17±1.96,36.43±2.89,51.71±1.87,各组间差异有统计学意义(p<0.05)。  结论:  UVB照射可使上皮细胞DNA产生损伤,降低其增殖活性,诱导其发生细胞凋亡,并且呈明显的剂量依赖性,细胞DNA的损伤可能是高原某些罕见病的发病原因之一。
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