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第一部分靶向支架蛋白prohibitin与激酶CRAF间相互作用抑制RAS-RAF-ERK诱导的胰腺导管腺癌[目的]KRAS基因突变触发ERK1/2异常激活,最终促使胰腺导管腺癌(PDAC)的发生和发展。然而,研发的直接靶向KRAS蛋白的药物未在临床上获得成功。支架蛋白prohibitin (PHB)可使RAF在胞膜上的精确定位,以确保其在质膜上与RAS相互作用,从而介导下游效应蛋白的激活。本部分实验中,我们探索支架蛋白PHB在胰腺导管腺癌的生长、侵袭与转移中所扮演的角色。[方法]检测PHB在人类胰腺癌细胞株、正常胰腺和胰腺导管腺癌组织的表达水平。此外,用小RNA干扰技术或PHB小分子抑制剂Rocaglamide (RocA)处理胰腺癌细胞,以验证其在体外和体内胰腺癌细胞生长、迁移以及信号传导通路中的作用。[结果]PHB的表达水平对于ERK1/2诱导胰腺肿瘤的发生至关重要。再者,RocA选择性地以纳摩尔浓度的亲和力结合到PHB,通过改变其质膜上的定位,进而阻断PHB和CRAF间相互作用。因此,抑制了Ras-ERK信号通路,从而在体外和体内阻止RAS-ERK信号通路诱导的胰腺癌细胞生长、转移。更重要的是,RocA治疗使异种移植瘤小鼠的生存期显著增加,且对其无可检测到的毒性。[结论]与以往直接激酶抑制剂不同,阻断支架蛋白PHB与激酶CRAF间相互作用可能是一个靶向ERK诱导的胰腺导管腺癌的新策略。第二部分Rocaglamide下调c-FLIP而激活caspase-8逆转肝癌细胞对TRAIL的耐药[目的]促进癌细胞凋亡是癌症治疗的一种新途径。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是一种有潜力的抗肿瘤药物。然而,肝癌细胞对TRAIL诱导细胞凋亡表现出极强的抵抗力。本部分实验中,我们研究Rocaglamide (RocA)是否增强抗肝癌细胞TRAIL介导凋亡的敏感性。[方法]用RocA和／或TRAIL处理肝癌细胞系(HepG2和Huh-7细胞),用各种方法检测肝癌细胞的凋亡情况。在Huh-7源性肿瘤异种移植小鼠中,验证RocA体内的抗肿瘤效果。[结果]RocA处理使c-FLIP下调,致使caspase-8活化,最终显著增强了抗TRAIL肝癌细胞凋亡的效果。此外,RocA明显抑制了源自Huh-7细胞异种移植肿瘤的在SCID小鼠中的生长,这表明,在体内RocA亦发挥抗肿瘤效用。[结论]总之,我们的结果表明RocA可以协同TRAIL促进TRAIL耐药肝癌细胞的凋亡。因此,我们得出结论,RocA可以作为以TRAIL为基础治疗的佐剂,为肝癌的治疗提供一个新的治疗策略。