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目的:
1.探讨创伤性脑损伤后大鼠海马CA1区神经元及胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)阳性星形胶质细胞的变化。
2.观察早期应用依达拉奉对创伤性脑损伤后大鼠海马CA1区神经元、GFAP阳性星形胶质细胞及神经细胞凋亡的影响。
方法:选用健康雄性Spraque-Dawley大鼠36只,体重280g~300g左右作为模型动物。按照改进的Feeney自由落体损伤装置制作大鼠创伤性脑损伤(traumaticbraininjury,TBI)模型。随机分成:假手术组(Sham),生理盐水组(NS),依达拉奉治疗组(edaravone,EDA)。治疗组于脑损伤30分钟后腹腔注射药物,剂量为3.0mg/Kg,1次/12h,连续给药3天。假手术组和生理盐水组在相同时间内给予等量生理盐水注射。全部大鼠在3天后处死,经心灌注固定,断头取脑,做冠状面的脑切片,选择两侧海马切片。进行HE染色并用神经元密度(neurnaldensity,ND)评价海马CA1区神经元损伤程度,星形胶质细胞免疫组化染色并进行GFAP阳性星形胶质细胞数目的定量分析和阳性细胞GFAP表达的积分光密度(integralopticaldensity,IOD)的半定量分析。原位缺口末端标记(Terminaldeoxynucleotidyltransferease-mediatedbiotinylateddeoxyuridinetriphosphatenickendlabeling,TUNEL)法研究海马CA1区神经细胞凋亡情况。
结果:
1.与假手术组比较,生理盐水组海马CA1区神经元绝大部分变性坏死,神经元密度明显降低,GFAP阳性星形胶质细胞数目增多,GFAP染色较深。与生理盐水组比较,依达拉奉组海马CA1区存活神经元增多,可见少量神经元变性坏死。GFAP阳性星形胶质细胞数目明显增多,染色较深,突起增粗,增长和分支增多。
2.生理盐水组海马CA1区神经元密度为8.90±2.14;依达拉奉组为18.63±3.55,与生理盐水组相比,差异具有显著性(p<0.05)。生理盐水组海马CA1区GFAP阳性星形胶质细胞数目和阳性星形胶质细胞的积分光密度值分别为6.99±2.10和22.35±6.15;依达拉奉组为12.11±2.34和33.24±8.17,生理盐水组相比,差异具有显著性(p<0.05)。
3.TUNEL检测发现生理盐水组可见大量凋亡细胞,依达拉奉组也可见凋亡细胞,但是与生理盐水组相比明显减少且有统计学差异(p<o.05)。
结论:EDA通过促进GFAP阳性星形胶质细胞活化增生,减少急性脑损伤后海马CA1区神经细胞的凋亡,从而达到脑保护作用。