PCR法鉴别双歧杆菌的研究

来源 :中国药品生物制品检定所 中国食品药品检定研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zeiwu158
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目的:应用16S rRNA序列设计PCR引物鉴别双歧杆菌.方法:1、该实验通过16S rRNA序列中第18-38位点和1425-1445位点设计引物对青春型、长型、短型、婴儿型、两歧型、链型等6个种共15株双歧杆菌和大肠杆菌等10株其它细菌进行PCR反应.用琼脂糖凝胶电泳法和Southern杂交法对PCR扩增产物进行特异性、敏感性检测.对青春型双歧杆菌2627号进行灵敏度测定.2、对青春型、长型、短型、婴儿型、两歧型、链型等6个种共1 5株双歧杆菌和大肠杆菌等10株其它细菌做荧光定量PCR;利用经稀释的青春型双歧杆菌2627号的PCR扩增产物的不同拷贝数作荧光定量PCR,制作标准曲线;通过与标准曲线比较可以对待检双歧杆菌进行定量分析;对青春型双歧杆菌2627号进行灵敏度测定.结论:利用双歧杆菌16S rRNA的第18-38位点和1425-1445位点设计引物作PCR可特异、灵敏的鉴别双歧杆菌,通过荧光定量PCR技术可正确定量样品中双歧杆菌量.
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