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芒果苷和新芒果苷为常用中药知母(Anemarrhenaasphodeloides Bunge)所含的2种主要口山酮类成分。芒果苷具有抗糖尿病、抗氧化、抗炎、抗癌、抗菌、抗艾滋病毒和免疫保护作用。新芒果苷为芒果苷衍生物(芒果苷-7-O-β-D-葡萄糖苷)，具有降血糖、抗骨质疏松等作用。上述两种化合物是本课题组多年研究的知母及复方中的主要有效成分之一。 为阐明芒果苷和新芒果苷的体内过程，揭示体内直接药效物质，本文对芒果苷和新芒果苷在离体肠道菌、正常大鼠、肠道菌抑制大鼠、糖尿病模型大鼠中的代谢和药代动力学，以及部分代谢产物富集分离和药理筛选等进行了较系统研究，取得以下主要成果： 1、芒果苷在正常大鼠及离体肠道菌中的代谢研究 采用HPLC-ESI-IT-MSn技术，在正常SD大鼠灌胃口服芒果苷后的血浆，尿液、粪便、组织(心、肝、脾、肺、肾)和肠道内容物中，除检测到芒果苷外，还分析鉴定出33个代谢产物，其中血中5个，尿中32个，粪便中8个，心中1个，脾中1个，肺中3个，肝中5个，肾中5个，肠道内容物9个。在芒果苷离体肠道菌培养物中，检测到代谢产物芒果苷元。 芒果苷在大鼠体内可能的代谢途径为：去糖基化，甲基化，糖基化，去羟基化，葡萄糖醛酸化，硫酸酯化。 2、芒果苷在正常大鼠和模型大鼠体内的代谢和药代动力学研究 分别给予正常Wistar大鼠、肠道菌抑制大鼠和STZ-诱导的糖尿病人鼠灌胃口服芒果苷后，收集血样、尿液和粪便。采用HPLC-ESI-IT-MSn技术，共鉴定出48个代谢产物。在正常大鼠给药后的血浆，尿液和粪便中分别检测到4个、22个和4个代谢产物；在肠道菌抑制大鼠给药后的血浆中只检测到原形，尿液和粪便中分别检测到6个和1个代谢产物；在糖尿病大鼠给药后的血浆，尿液和粪便中分别检测到13、42和6个代谢产物。分析发现：芒果苷在正常大鼠和糖尿病大鼠体内的代谢途径相似，但是该化合物在糖尿病大鼠体内的代谢产物数量远多于正常动物；在肠道菌抑制大鼠体内未检测到芒果苷元及其进一步代谢产物。提示肠道菌群在芒果苷代谢为芒果苷元的过程中发挥着主要作用。 建立了血浆中芒果苷的含量测定方法。对正常大鼠、肠道菌抑制大鼠和STZ-诱导的糖尿病大鼠灌胃口服芒果苷后其在血浆中的药动学进行了研究。结果显示，芒果苷在STZ.诱导的糖尿病大鼠体内的吸收程度明显高于其在正常大鼠和肠道菌抑制大鼠体内的吸收，该化合物在糖尿病大鼠中的Cmax分别为正常大鼠和肠道菌抑制大鼠体内的2.79和4.42倍，AUC0-t分别为2.35和2.07倍。 3、正常大鼠与模型大鼠肠道P-gp和肝脏代谢酶基因表达比较 对正常大鼠、肠道菌抑制大鼠和糖尿病大鼠肠道P-gp以及正常大鼠和STZ-诱导的糖尿病大鼠肝脏中主要Ⅱ相代谢酶的基因表达进行了比较。结果显示：与正常大鼠相比，肠道菌抑制大鼠各小肠段MDRlAmRNA水平明显提高，MDR1BmRNA水平明显降低；糖尿病大鼠十二指肠和空肠MDR1AmRNA水平降低，回肠MDR1AmRNA水平明显提高，而各小肠段MDR1BmRNA水平明显降低；STZ-诱导的糖尿病大鼠肝脏中corot，ugt2b6，ugt2b12，suitlc3的mRNA水平下降，而ugtla3，ugtla8，ugt2b8，suitlal的mRNA水平提高。这些初步结果从一个侧面揭示了芒果苷在正常大鼠、肠道菌抑制大鼠和糖尿病大鼠体内吸收及代谢产物数量差别明显的原因。 4、新芒果苷在正常大鼠和肠道菌抑制大鼠体内体外代谢和药代动力学研究 采用HPLC-ESI-IT-MSn技术，对新芒果苷体内体外代谢进行系统研究，共鉴定出34个代谢产物。结果显示：新芒果苷体外可被离体肠道菌群代谢为芒果苷和芒果苷元；正常大鼠静脉注射新芒果苷后，在血浆、尿液和粪便中分别检测到1个、1个和6个代谢产物；肠道菌抑制大鼠口服新芒果苷后，在血浆、尿液和粪便中分别检测到2个、6个和5个代谢产物；正常大鼠口服新芒果苷后，在血浆、尿液和粪便中分别检测到7个、29个和8个代谢产物。正常大鼠静脉注射新芒果苷以及肠道菌抑制大鼠口服新芒果苷后，代谢过程基本相似：新芒果苷代谢转化为芒果苷后，芒果苷仪发生了Ⅱ相代谢，而未被代谢为芒果苷元及发生进一步转化。正常大鼠口服新芒果苷后，新芒果苷经历了广泛的代谢，首先代谢为芒果苷，之后与口服芒果苷代谢途径相似。可见肠道菌在新芒果苷体内代谢尤其在芒果苷代谢为芒果苷元过程中发挥着重要作用。 建立了同时测定血浆中新芒果苷和芒果苷含量的方法。对正常大鼠分别灌胃口服、静脉注射新芒果苷以及肠道菌抑制大鼠口服新芒果苷后新芒果苷和芒果苷在血浆中的药动学进行了研究。结果显示，新芒果苷口服生物利用度为0.32％。正常大鼠静脉注射新芒果苷后，迅速代谢为芒果苷。正常大鼠和肠道菌抑制大鼠口服新芒果苷后，在体内迅速吸收和消除，新芒果苷和芒果苷在正常大鼠体内Cmax和AUC0-t均远高于肠道菌抑制大鼠口服新芒果苷后的相应参数。 5、芒果苷主要代谢产物的抗糖尿病活性研究 从大鼠灌胃口服芒果苷后的尿液和粪便中共富集分离得到6个化合物，包括芒果苷原形成分和芒果苷元等5个代谢产物，通过核磁等多种波谱技术确证其结构，同时采用化学合成方法制备芒果昔元四乙酰基衍生物。初步的体外抗糖尿病活性及机制研究表明(与其它组合作)：芒果苷及其代谢产物和化学衍生物均具有不同程度的药理活性，可抑制线粒体膜电位、刺激AMPK及下游ACC的磷酸化，通过抑制PTP1b的活性达到保护IR磷酸化的作用。其中，芒果苷元和其四乙酰基化学衍生物的活性强于原形成分芒果苷。