广西罗非鱼链球菌的分离鉴定、药敏试验与病理学研究

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罗非鱼是我国重要的水产养殖鱼类,由于其生长快,食性杂,无肌间刺等优点深受养殖户及消费者欢迎。2011年,广西壮族自治区罗非鱼爆发链球菌病,造成严重的经济损失。患病罗非鱼表现为典型的败血症,常在池边漫游,间歇性打转,摄食减少,眼膜发白,单眼或双眼突出,甚至脱落,腹部体表具点状或斑块出血或溃疡,鳃盖内侧出血,鳍条基部充血,肝脏、胆囊、脾脏肿大,严重时糜烂,腹腔有积水。从广西罗非鱼流行病爆发区(宜州、柳州、北海)分离获得5株细菌,将细菌对罗非鱼进行人工感染试验,感染罗非鱼表现出自然发病症状,确认分离菌株为罗非鱼流行病的致病菌。对分离株菌进行形态学观察、API20Strep快速鉴定和16S rRNA基因序列分析,结果表明宜州分离株为海豚链球菌(Streptococcus iniae),柳州、北海分离株为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)。对各菌株进行45种药物敏感性试验,结果表明海豚链球菌对哌拉西啉、头孢拉啶(先锋Ⅵ)、头孢孟多等23种药物较为敏感,不同地区无乳链球菌各菌株之间的药物敏感性各不相同。所有无乳链球菌菌株对哌拉西啉、头孢拉啶(先锋Ⅵ)、头孢孟多等11种药物敏感,总体是青霉素类、头孢菌素类、四环素类、糖肽类、大环内酯类、喹诺酮类、利福霉素类、多粘菌素类、酰胺醇类。通过组织病理学及超微病理学观察发现感染海豚链球菌的罗非鱼脑、肾脏、脾脏、肝脏、肠、心、骨骼肌和鳃等多个器官组织发生不同程度的病变,其中以肝脏、脾脏、肾脏、鳃病理变化最为显著,主要表现为细胞局部坏死、炎细胞浸润。肝脏发生水肿变性,坏死,血窦扩张充血;胰腺细胞坏死溶解;脾脏炎细胞浸润,含铁血黄素沉积。肾脏小管上皮细胞水肿,玻璃样变性,肾间质许多炎性细胞浸润。超微观察发现病鱼肝细胞核萎缩,染色质边集于细胞核内膜,粗面内质网池扩张,膜上的核糖体颗粒不同程度散落,线粒体肿大,嵴溶解。脾脏细胞可见细菌,细胞核膜断裂,溶解,核染色质边集,碎裂。网状细胞胞质透亮,细胞器减少,内含物减少,呈现水肿状态。肌原纤维断裂错位,排列紊乱,明暗带模糊。肌丝坏死出现空泡化。心肌原纤维断裂坏死,线粒体减少,肿胀,溶解,坏死,嵴断裂,出现髓鞘样结构。脑小胶质细胞染色质溶解边集,电子密度低,组织中见许多空泡。在28℃、33℃两种温度下,用海豚链球菌人工感染尼罗罗非鱼后,研究感染后不同时段尼罗罗非鱼血液生化指标和组织病理变化。结果显示病鱼两个温度水平血清总蛋白(TP)随时间延长都呈现升高趋势;谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性随时间延长先升高后降低再升高,33℃实验组ALT、AST活性比28℃实验组达峰值时间短,并显著高于对照组(P<0.05);尿素(UREA)、钾(K+)含量随时间延长逐渐升高后降低,钠(Na+)含量先升高后降低再升高,肌酐(CREA)含量呈上升趋势;28℃实验组血清碱性磷酸酶(AKP)活性先升高后降低,33℃实验组呈升高趋势;超氧化歧化酶(SOD)活性随时间延长先升高后降低再升高,33℃实验组各个时间点基本高于28℃实验组;球蛋白(GLO)随感染后时间延长呈现升高趋势,至120h,显著高于对照组(P<0.05),但温度组间各时间点没有显著差异(P>0.05)。组织病理学观察发现33℃实验组肝细胞、肾小管上皮细胞水肿变性;28℃实验组肝细胞出现嗜酸性小体;肾小管上皮细胞出现嗜酸性的红色小体,颗粒变性。综上表明感染海豚链球菌的尼罗罗非鱼肝脏、肾脏均有损伤,造成功能障碍,在高温时更严重。
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