研究背景与目的：核因子-kB(NF-kB)在衰老进程中起关键作用。在淋巴细胞，NF-kB活性随增龄而显著降低。文献中对衰老进程中NF-kB表达特点研究，多直接 采用青年与老年两个组别，研究指标一般选取NF-kB的DNA结合活性做为结局性 衡量。但由于NF-kB多向转录调节的特点，NF-kB家族不同成员、NF-kB信号通路 中的刺激物性质、调节蛋白、及靶基因数目，都将显著影响NF-kB激活后的转录产物及活性。因此，为了全面研究衰老进程中NF-kB转录调控所涉及到的相关信号分子 在各个年龄段的表达特征，我们采用了NF-kB信号通路功能基因芯片。本研究首次选取SD大鼠在衰老进程中的5个特定年龄，研究衰老进程中各年龄段淋巴细胞 NF-kB信号通路中相关分子功能类别mRNA水平的整体表达特征及差异；并结合衰 老进程中淋巴细胞凋亡率的比较、老年期NF-kB信号通路分子的差异表达、及通过对老年态下Th1，Th2，Th3类细胞因子之间比例失衡关系的转归，进一步观 察淫羊藿总黄酮(EF)对免疫衰老的干预效应及调控机制。 研究内容及方法： 1．衰老进程中各年龄段淋巴细胞凋亡率的比较研究及EF的干预作用选用SD大鼠脾脏分离的淋巴细胞为研究对象，用流式细胞方法，进行以下两部分研究：A.比较研究4月龄(4m)、27月龄(27m)、27m+EF三组CD3抗体诱导 的淋巴细胞凋亡率差异，及EF对27m组的干预作用；并且进一步研究对27m采用NF-kB抑制剂PDTC处理后的淋巴细胞凋亡变化及EF同期干预效应。B．着重比较 研究从出生后3天直到27m衰老过程中各代表性年龄段的细胞凋亡率差异，并继续观察EF对老年淋巴细胞过度凋亡的影响作用，旨在为后续相关研究工作提供药效 基础。 2．衰老进程中各年龄段淋巴细胞中NF-kB信号通路相关分子mRNA差异表达特征 及EF的干预效应以SD大鼠脾脏分离的淋巴细胞为研究对象，采用NF-kB信号通路功能基因组Oligo芯片(128个相关基因)，首次选取SD大鼠在衰老进程中的几个特定年龄： 3d，4m，10月龄(10m)，18月龄(18m)，27m，研究衰老进程中各年龄段淋巴细胞 NF-KB信号通路中相关分子功能类别的mRNA水平的整体表达特征及差异，并观察EF对老年大鼠(27m)淋巴细胞NF-KB信号通路各功能类别的整体干预效应。 3.EF经由NF-KB相关信号转导途径调控免疫衰老机制以SD大鼠脾脏分离的淋巴细胞为研究对象，采用NF-KB信号通路基因芯片(cDNA芯片，96个相关基因)，分别检测27m老龄大鼠、27m+EF组、27m PDTC(NF-KB阻断剂)组、27m PDTC+EF组的NF-KB相关信号差异表达，并设4m 大鼠做青年对照组，提取其中有显著意义的主要分子，加以分析。 4.EF经由Th1，Th2，Th3细胞网络调控免疫衰老机制以SD大鼠脾脏分离的淋巴细胞为研究对象，采用Th1，Th2，Th3 cDNA 芯片 (96个相关基因)，分别检测4m、27m、27m+EF、27m PDTC、27m PDTC+EF组的 Th1，Th2，Th3各类细胞因子信号差异表达概况，提取其主要差异表达特征，进行全 面分析。 研究结论： 1．随着增龄，大鼠淋巴细胞细胞凋亡逐渐升高，Th2、Th3类细胞因子优势应答，Thl，Th2，Th3类细胞因子之间比例失衡，免疫功能下降。 2．NF-κB在衰老进程中起非常关键作用。通过对各代表性年龄淋巴细胞NF-κB信号通路中6大功能类的mRNA差异比较发现：NT-κ信号通路相关分子mRNA的平均表达水平均随增龄逐渐降低。其中变化最显著的是Signal Transduction Kinases、Rel/NF-κB/IkB Family、NF-κB Responsive Genes，尤其是Signal TransductionKinases。这三大功能类的mRNA均在出生后3d表达强度最高，之后随着增龄而逐渐降低，且降幅较大，在27m降到最低。提示在衰老进程中，淋巴细胞NF-KB信号通路信号转导激酶及其以下途径相关分子表达衰退，是决定NF-KB活性及其调控靶基衡免疫稳态、延缓免疫衰老的重要机制。