【摘 要】
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根据群特异性抗原的不同,禽腺病毒(Fowl Adenovirus,FAV)属可分为3群:Ⅰ群、Ⅱ群和Ⅲ群。Ⅰ群禽腺病毒包括从鸡、火鸡、鹅及其它禽类分离获得的腺病毒。Ⅰ群禽腺病毒JS株的Ⅲ
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根据群特异性抗原的不同,禽腺病毒(Fowl Adenovirus,FAV)属可分为3群:Ⅰ群、Ⅱ群和Ⅲ群。Ⅰ群禽腺病毒包括从鸡、火鸡、鹅及其它禽类分离获得的腺病毒。Ⅰ群禽腺病毒JS株的Ⅲa蛋白位于病毒衣壳的表面,由前体蛋白剪切后磷酸化而成,每个五邻体基底与5个pⅢa单体相连。本研究根据Genbank上公布的鸡胚致死孤儿病毒( CELOV )Ⅲa蛋白核酸序列设计一对引物。SDS-蛋白酶K法提取病毒DNA作为PCR扩增模板,PCR扩增到1728 bp的特异性条带。将其克隆入pGEX-6p-1原核表达载体中。经测序验证,获得的序列与CELOVⅢa蛋白基因进行比较,结果发现两病毒蛋白基因同源性达到了99.7%。用已构建好的表达FAVI-JS株Ⅲa基因的原核表达载体pGEX-Ⅲa转化大肠杆菌BL21 ( DE3 ),挑取阳性克隆培养,IPTG诱导后裂解菌体作SDS-PAGE,出现与谷胱甘肽S转移酶(GST)融合表达产物,并用Western-blot进一步验证,结果证明Ⅲa蛋白获得表达。通过杂交瘤技术,将用FAV-JS株病毒鸡胚尿囊液免疫的小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0进行细胞融合,HAT选择性培养基培养10天后,将收取的上清与原核表达的Ⅲa蛋白进行ELISA试验,通过有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行亚克隆,最终获得了6株能分泌抗Ⅲa蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为FAV-IIIa-2E5,FAV-IIIa-3B4 , FAV-IIIa-3F8 , FAV-IIIa-3E11 , FAV-IIIa-4C3 ,FAV-IIIa-6D3。这些单抗的研制为研究该病毒的分子生物学功能提供了重要的生物材料。
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