论文部分内容阅读
目的和背景脓毒症(sepsis)是由严重感染、烧伤、创伤和重大手术等多种因素而引起的机体免疫反应失调,促炎因子和抗炎因子分泌的不平衡参与疾病的病理生理过程,常伴有多器官功能衰竭,是危重患者死亡的主要原因之一。脓毒症性心肌功能障碍(sepsis-induced myocardial dysfunction,SIMD)是脓毒症性多器官功能障碍的其中之一,主要临床表现为心肌抑制,即左心室收缩功能减弱、低心排量。长链非编码RNAs(long non-conding RNAs,lncRNAs)是一类真核细胞内普遍存在的转录本长度超过200 nt的RNA,但其本身并不编码蛋白质,以RNA的形式存在于细胞核或细胞质内调控蛋白编码基因区,其作用机制多样且在多个层面调控基因的表达,在炎症反应、类风湿关节炎、血管老化和肿瘤生物学中具有重要功能作用。例如,lncRNA IL17R部分在细菌内毒素脂多糖(LPS)诱导炎症反应;lncRNA H19作为一种致癌基因,通过与非编码RNA的相互作用参与癌症的发生和转移。在过去的几十年里,研究人员对脓毒症的发病机制进行了探索,发现脓毒症的发生发展除了内毒素和病原体外,还与免疫系统功能障碍和基因表达密切相关。脓毒症引起过度炎症反应、免疫抑制或过度组织损伤,增强了继发性感染的易感性。因此,探讨脓毒症相关的免疫反应机制对脓毒症的诊治至关重要。本研究旨在探讨lncRNA H19对脓毒症小鼠炎症反应和心脏功能的影响,为脓毒症及相关并发症寻找可能存在的治疗靶点。方法纳入脓毒症患者,健康对照患者,空腹留取外周静脉血,离心制备血浆,应用qRT-PCR法测定血浆lncRNA H19的相对表达水平,统计数据,分析两组表达水平差异。选取雄性BALB/c小鼠,随机分为6组,其中1组为对照组,另外5组构建脓毒症小鼠模型,应用慢病毒载体质粒转染技术和RNA干扰技术构建调控小鼠lncRNA H19的表达,通过测定小鼠促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6和EF(%),FS(%)评估对炎症反应和心脏功能的影响。结果测定和比较脓毒症患者组和健康对照组lncRNA H19的表达水平,提示脓毒症患者组较健康对照组lncRNA H19的表达水平明显降低(P<0.01)。本试验中脓毒症小鼠模型低表达lncRNA H19下降(P<0.01),同时血浆TNF-α,IL-1β,and IL-6等促炎因子分泌增加并伴有EF(%)、FS(%)值降低(P<0.01)。上调lncRNA H19表达,促炎因子分泌水平和EF(%)、FS(%)值升高(P<0.001),下调lncRNA H19表达,促炎因子分泌进一步下降,同时EF(%)、FS(%)值也继续降低(p<0.01)。结论在脓毒症患者和LPS所致小鼠脓毒症模型中lncRNA H19表达下调,同时伴有TNF-α,IL-1β,and IL-6等促炎因子过度分泌和心脏功能下降;通过构建并转染lncRNA H19质粒载体增加小鼠lncRNA H19的表达,可逆转促炎因子分泌的失调,同时改善脓毒症小鼠模型心脏功能;提示lncRNA H19参与了脓毒症炎症反应和心脏功能的调节,可能为脓毒症的诊断治疗提供新的靶点。