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卵巢癌起病隐匿,发现时常为晚期,不能实施理想的肿瘤细胞减灭术,长期化疗也会出现化疗耐药,严重威胁着妇女的生命和健康。近年来卵巢癌的免疫治疗成为备受关注的一种新的辅助治疗方法,其一方面可有效杀伤体内残余癌细胞,抑制肿瘤细胞复发转移,另一方面还能有效提高患者自主抗癌免疫能力,增强患者体质,减少化疗耐药性,提升卵巢癌化疗效果,最终提高患者生存质量,延长有效生存期。本研究的目的是寻找一种安全性更高、疗效更好的免疫治疗方法来抑制和杀伤卵巢癌细胞,抵抗化疗耐药。本研究针对上述问题,利用双信号激活途径,建立一种CTL大量制备的新技术,在人参皂苷Rg1、CPGODN、肿瘤特异性抗原肽(SAg)的共同作用下,外周血中的淋巴细胞经过双信号途径被激活、并高效扩增,将其命名为CSR-CTL.首先通过绘制细胞生长曲线、染色体核型分析、免疫表型CD3、CD4、CD8因子流式细胞仪检测等方法鉴定CSR-CTL培养体系。通过MTT法检测CSR-CTL对人卵巢癌细胞株SKOV-3的杀伤作用;生长曲线法观察CSR-CTL对人卵巢癌细胞SKOV-3的生长抑制作用;流式细胞仪检测CSR-CTL处理前后人卵巢癌细胞株SKOV-3的细胞周期及凋亡率;用实时定量PCR、Western blot的方法检测CSR-CTL处理前后人卵巢癌细胞株SKOV-3中相关凋亡蛋白的表达变化。通过上述方法探讨CSR-CTL活化后对卵巢癌细胞的抑制作用,及杀伤卵巢癌细胞SKOV-3的作用机制。RT-PCR方法检测CSR-CTL作用前后人卵巢癌耐药细胞株中HER2/neu以及耐药相关基因的表达情况;最后通过实时定量PCR、Western blot的方法检测CSR-CTL处理前后卵巢癌耐药细胞SKOV-3中PI3K/Akt信号转导通路的主要蛋白表达,探讨CSR-CTL逆转卵巢癌化疗耐药的作用机制。本实验为系统研究CSR-CTL作为一种新型的免疫活性细胞,在卵巢癌免疫治疗中的作用奠定基础,并为其在临床上的广泛推广使用提供理论依据。本研究的创新之处在于:(1)首次将CPGODN和Rg1联合作为免疫佐剂,与HER2/neu抗原肽结合建立CSR-CTL的体外大规模培养体系;(2)证实了CSR-CTL增殖能力强、高度抗原特异性及显著的细胞毒作用的优点;(3)首次应用CSR-CTL在体外研究其特异性、高效性杀伤、抑制卵巢癌细胞;(4)首次探讨CSR-CTL参与逆转卵巢癌耐药的机制。