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目的本研究旨在进一步验证子痫前期患者体内Th17、Treg细胞的表达情况与Notch信号通路的关系,同时观察在给予Notch信号通路抑制剂后,三者之间的关系,进一步阐明子痫前期的发病原因,并尽可能的为子痫前期的治疗研究提供新的靶点和实验基础。方法重度子痫前期组(SP组):该组入选患者均为2018年11月至2019年6月在甘肃省人民医院产科住院诊断为重度子痫前期的孕妇,共30例;正常NC组(NC组):该组入选患者均为2018年11月至2019年6月产前检查正常的健康孕妇,共30例。SP组和NC组孕次、年龄等一般资料无显著差异(P>0.05),SP组和NC组相比较,SP组患者分娩孕周明显比NC组低,存在显著差异(P<0.05)。分别用不同浓度的DAPT与相同体积的DMSO处理SP组和NC组外周血T淋巴细胞,并采用流式细胞术对各组中Th17细胞、Treg细胞、Th17/Treg比值等指标进行检测、采用酶联免疫法对各组中IL-17、IL-10的表达进行检测,分析比较各组之间的表达特点及差异。结果1.通过流式细胞仪分析结果显示,NC组患者血清中Th17/CD4+T、Treg/CD4+T、Th17/Treg比值分别为1.63±0.32%、3.73±0.32%、0.44±0.09,SP组患者血清中Th17/CD4+T、Treg/CD4+T、Th17/Treg比值分别为3.90±0.28%、2.24±0.45%、1.83±0.48,SP组和NC组相比较,SP组患者血清中Th17/CD4+T表达含量比NC组高(t=-29.209,P<0.001),SP组患者血清中Treg/CD4+T表达含量比NC组低(t=14.842,P<0.001),SP组患者血清中Th17/Treg比值表达含量比NC组高(t=-15.505,P<0.001)。2.酶联免疫实验检测结果显示,NC组患者血清中炎性因子IL-17、IL-10表达水平分别为35.52±3.52、37.86±3.98ng/L,SP组患者血清中IL-17、IL-10表达水平分别为68.54±9.86、27.58±4.58ng/L,SP组和NC组相比较,SP组患者血清中IL-17表达含量比NC组高(t=-17.275,P<0.001),SP组患者血清中IL-10表达含量比NC组低(t=9.271,P<0.001)。3.为验证DAPT是否对Notch1信号通路基因起抑制作用,明确Notch1信号通路基因在重度子痫前期患者Th17/Treg失衡中的作用,Real-time PCR检测结果显示,SP组患者分别在对照及10、20、30umol/L DAPT浓度下Notch1 mRNA为1.24±0.65、1.19±0.59、1.11±0.43、1.06±0.49,NC组患者分别在对照及10、20、30umol/L DAPT浓度下Notch1mRNA表达水平为0.67±0.21、0.64±0.16、0.55±0.12、0.52±0.09,未添加DAPT时,SP组患者血清中Notch1 mRNA含量就显著高于NC组(t=5.533,P<0.05),表明Notch1自身参与疾病的变化;随着DAPT浓度的升高,Notch1 mRNA表达水平下降,表明Notch1 mRNA含量与DAPT浓度梯度呈一定关系,但变化差异较小(P>0.05)。4.DAPT抑制Notch信号通路,使PE患者血清中Th17细胞表达及Th17/Treg的比值出现明显下降。检测结果显示,SP组患者分别在对照及10、20、30umol/L DAPT浓度下Th17/CD4~+T表达水平为3.90±0.28%、1.96±0.14%、1.67±0.12%、1.44±0.11%,Treg/CD4~+T表达水平为2.24±0.45%、2.19±0.47%、2.33±0.47%、2.28±0.46%,Th17/Treg比值为1.83±0.48、1.01±0.41、0.75±0.20、0.66±0.17。DMSO条件下,SP组患者血清中Th17细胞含量显著高于NC组(t=29.240,P<0.05),Treg细胞含量比NC组低(t=14.780,P<0.05),Th17/Treg比值显著高于NC组(t=15.590,P<0.05)。随着DAPT浓度的升高,SP组患者Th17细胞含量显著下降,Treg细胞表达出现一定升高,但不显著,Th17/Treg比值降低,表明Th17细胞、Th17/Treg比值与DAPT浓度呈显著相关性,30umol/LDAPT条件下Th17细胞、Th17/Treg比值与10umol/L DAPT条件下相比差异显著(均P<0.05)。NC患者经过DAPT处理后,Th17细胞、Treg细胞表达水平及Th17/Treg比值数值变化较小(均P>0.05)。5.DAPT抑制Notch信号通路,能够对PE患者体内Th17、Treg相关细胞因子的表达产生显著影响。检测结果显示,SP组患者分别为在对照及10、20、30umol/L DAPT浓度下IL-17表达水平为68.54±9.86、61.73±9.28、48.43±7.27、36.40±4.37ng/L,IL-10表达水平为27.58±4.58、29.63±4.56、28.49±4.49、29.44±4.75ng/L。DMSO条件下,SP组患者血清中IL-10含量显著低于NC组(t=9.280,P<0.05),IL-17含量显著高于NC组(t=17.270,P<0.05)。随着DAPT浓度的升高,SP组患者体内IL-17表达水平显著下降,IL-10表达水平有轻微升高趋势,表明IL-17表达水平与DAPT浓度呈负相关关系,而IL-10表达水平与DAPT浓度相关性较小,30umol/L DAPT条件下IL-17表达水平与10umol/L DAPT条件下IL-17表达水平相比差异显著(均P<0.05)。NC组患者经过DAPT处理后,IL-17、IL-10表达水平相差较小(均P>0.05)。结论患有子痫前期的患者体内的Th17、Treg细胞含量、Th17/Treg数值均与健康孕妇存在一定差异,同时,IL-17、IL-10等炎性因子的表达水平也出现异常。加入DAPT后发现子痫前期患者Th17细胞及其相关细胞因子的表达降低,进而改善PE患者的病情发展,其原理可能与抑制Notch蛋白及mRNA的表达有关。应用DAPT可能是未来治疗PE的新靶点。