论文部分内容阅读
雷公藤具有抗炎、免疫抑制等药理作用,广泛用于治疗类风湿性关节炎、肾病综合征、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病及器官移植中的免疫排斥反应,疗效显著。但雷公藤是有毒中药,药效物质基础尚不完全明确,市售不同制剂不良反应和疗效差别很大,临床应用受到一定限制。现有提取纯化工艺使用了氯仿、甲醇等限制级有机溶剂,对环境造成破坏。本文采用谱效结合研究方法,对雷公藤乙醇回流提取结合大孔吸附树脂纯化工艺进行研究,目的是建立一套摒弃氯仿、甲醇等限制级有机溶剂的雷公藤提取纯化工艺。本课题建立了高效液相色谱指纹图谱与多指标成分含量测定相结合的方法,作为工艺研究的质量控制方法。比较了雷公藤根、根芯和根皮的指纹图谱以及市售不同雷公藤制剂的指纹图谱,发现雷公藤根指纹图谱中色谱峰全面,确定将雷公藤根作为本工艺的药材。以雷公藤内酯醇、雷公藤内酯酮、雷公藤红素、雷公藤内酯甲和总二萜内酯得率为指标,对乙醇浓度、提取时间、提取次数等进行单因素考察。建立系膜增生性肾小球肾炎细胞模型,以细胞增殖抑制率为指标,对不同浓度乙醇提取物进行细胞药效学评价。结果发现,60%乙醇提取物组（40μg·L-1）与血管紧张素Ⅱ刺激组相比,具有显著性差异（p<0.05）。以雷公藤内酯醇、雷公藤红素和雷公藤内酯甲的总提取率为指标,正交试验设计优化提取工艺,确定提取工艺为:雷公藤根粗粉,料液比1:10,95%乙醇回流提取2次,每次1h。验证试验表明,指标成分平均提取率为74.10%。以雷公藤内酯醇、雷公藤内酯酮等的转移率为指标,初步确定大孔树脂纯化工艺为:HPD722树脂径高比为1:10,树脂总量与药材比1:2,拌样树脂与树脂总量比1:10,湿法装柱,拌树脂上样。12BV的20%乙醇以12BV·h-1的流速清洗,后用12BV的95%乙醇,以6BV·h-1的流速洗脱并收集。建立大鼠佐剂性关节炎模型,对大孔吸附树脂不同浓度乙醇洗脱物进行药效学评价。结果发现,以IL-1含量为指标时,40%、60%、80%和95%醇洗脱物组与模型组具有显著性差异（p<0.05）;以足肿胀度为指标时,仅60%、80%醇洗脱物组与模型组有显著性差异（p<0.05）;以TNF-α含量为指标时,仅60%醇洗脱物组与模型组有显著性差异（p<0.05）。结果表明,60%醇洗脱物疗效最为显著。急性毒性试验表明,60%醇洗脱物的LD50为382.58±77.19mg·kg-1。