α黑素细胞刺激素（alpha-melanocyte stimulating hormone，α-MSH）是来源于前体分子前阿黑皮素原的十三肽。除了促进黑色素形成外α-MSH还具有显著的退热、抗炎和免疫调节作用，是神经内分泌免疫调节研究领域的热点之一。α-MSH可以减轻内毒素引起的肝脏炎症及脑部炎症，降低内毒素血症小鼠的死亡率，阻断接触性超敏反应的诱导和激发，还能引起半抗原特异性免疫耐受等。α-MSH的这些生物学作用由黑皮质素受体（melanocortin receptors，MCRs）介导，现已发现五型MCRs（MC1～5R），广泛表达于全身各组织和细胞，包括单核细胞、中性粒细胞和B淋巴细胞等免疫细胞。 尽管在如此众多的细胞上都发现了MCRs的表达，并且研究了MCRs所介导的生物学作用，但目前尚未见T细胞表达MCRs的报道。T淋巴细胞是机体免疫应答过程中一类十分重要的免疫细胞，其是否表达MCRs？表达何种型别MCR？均尚未明了。因此，在本课题的第一部分中我们首先用同位素标记的α-MSH类似物[¹²⁵I]-NDP-MSH，经放射性配体竞争性结合实验证实在人的永生性T淋巴细胞株Jurkat细胞上存在能与α-MSH特异性结合的位点。分别以特异性抗MC1R～MC5R的抗体，经间接免疫荧光及FACS技术在正常人外周血T淋巴细胞上检测到MC1～5R蛋白。用合成的MC1R～MC5R特异性引物，采用RT-PCR方法发现Jurkat及Molt-4细胞均表达MC1～5R的mRNA。从而在蛋白和基因水平上证实T细胞表达五种型别的MCR。虽然CD4⁺和CD8⁺T细胞亚群分别可以表达五型MCRs，但每一型MCR在不同细胞亚群中表达的数量不同。为了进一步研究α-MSH是否可以通过与相应的受体结合而直接调节T细胞的功能，我们以Jurkat细胞作为研究对象，观察了α-MSH对PHA刺激Jurkat细胞增殖、产生IL-2和表面免疫相关分子表达的影响。结果表明： 第二军医大学硕士研究生论文 中文摘要 10＊’mol／L～10－‘mol／L a．MSH可以抑制 PHA刺激弓】起的 Jurkat细胞增 殖反应，抑制曲线呈“U”型；类似的作用曲线可见于抑制IL上的产 生及细胞膜表面分子CDZ、CD3、CD25、CD28及CD45分子的表达； 分别用抗MC RMCSR的抗体阻断MCRs，可部分逆转a－MSH抑制 Jurkat细胞分泌 IL上的作用。研究并证实了a－MSH对活化 T细胞核 转录因子（NFAI’）结合DNA活性具有抑制作用，从T细胞产生几上 的信号转导途径方面初步揭示了a－MSH作用的分子机制。 根据a－MSH的抗炎作用和第一部分的实验结果，我们推测体内 应用 a－MSH可以抑制主要由 T淋巴细胞介导的自身免疫性疾病的发 生与发展。实验性变态反应性脑脊髓炎田AE)是一种主要由CD41淋 巴细胞介导的发生在中枢神经系统中的自身免疫性炎症和脱髓鞘性 病变，常被用作人类自身免疫性疾病多发性硬化的动物模型。CD4“T 细胞和M4等分泌众多的细胞固子以及NO在EAE的发生服展过程 中起到重要的作用。为此，在本课题的第＝部分中，我们选择s几小 鼠EAE作为动物模型，研究了a－MSH在体内对EAE是否有阻抑作用， 并探讨了相关的免疫学机制。实验结果表明，a－MSH可以明显降低 主动型及被动型EAE的发病率、延长起始发病时间、降低能反映临 床症状严重程度的平均最大临床评分，组织病理学检查发现a．MSH 可以减少 CNS内炎症细胞的浸润、减轻神经组织病变。这些结果从 整体动物水平反映了a－MSH对E胚，J、鼠的保护作用。应用 FACS ＠1 定技术发现a－MSH K以明显减少 E胚。J、鼠脑脊髓匀浆细胞中的 CD4丫细胞的数量，抑制 MHC 11和 CD54分子的表达。EAE动物t 清中、脾细胞培养上清及CNS中IL2的含量明显高于正常对照组， 而皿－4和几q 的含量则无明显增高，给子 a－MSH后L上的含量显 著降低，IL＊和 IL上 的含量则显著高于 EAE组。说明 a．MSH可以 抑制孔 l型细胞因子的分泌并促进 ThZ型细胞困子产生，促进 hi 型免疫应答向 ThZ型转化。a－MSH ffiy以降低 E灶动物血清中及 CNS中 NO的生咸。上述效应，除了a－MSH直接对T细胞的作用外， 也可能包括对诸如单核／巨噬细胞系、脑血管内皮细胞及星形胶质细胞 等作用的综合结果。 本课题研究和证实了T淋巴细胞上表达五型MCRs；a－MSH在体 2 第二军医大学硕士研究生论文 中文摘要 外对人T淋巴细胞功能有直接调节作用，体内给予a－MSH对主要由 CD4”T淋巴细胞