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叶绿体是高等植物细胞半自主性细胞器,其自身含有基因组。叶绿体基因的表达需要两类RNA聚合酶:核基因编码的RNA聚合酶(NEP)和质体编码的RNA聚合酶复合物(PEP)的参与,其中PEP是叶绿体中主要的RNA聚合酶,其含有四个核心亚基α、β、β’、β’’和一些重要的外围蛋白,其调节机制是十分复杂的,组分的功能多数尚不清楚。p TAC7是叶绿体编码的RNA聚合酶复合物组分之一,本实验室早期获得ptac7两个等位突变体ptac7-1和ptac7-2,都呈现白化表型,它们的叶绿体发育严重受损,PEP负责转录的叶绿体基因的表达均低于野生型,表明了p TAC7参与调控质体基因表达。本论文中,我们构建了p TAC7基因组融合标签蛋白的植株。融合4x MYC和GFP标签的p TAC7的基因组序列能够成功互补ptac7-2突变体,这表明,融合标签后的蛋白是有功能的。利用激光共聚焦显微镜观察了稳定的转基因株系p TAC7:GFP的标签植株,结果表明,发现融合有GFP的p TAC7蛋白定位于叶绿体内。进一步分离稳定的转基因互补植株中的叶绿体、类囊体和基质,并利用特异性的MYC、GFP抗体免疫杂交分析,结果表明,p TAC7与叶绿体类囊体紧密联系。利用p TAC7:MYC标签植株结合免疫共沉淀和质谱分析,共鉴定到120个叶绿体蛋白,其中包括PEP的核心亚基rpo A、rpo B、rpo C1、rpo C2以及p TAC2、p TAC3、p TAC10、p TAC6、p TAC14、Trxz、FLN1、FLN2、FSD2的PAPs蛋白。利用p TAC7:MYC标签植株提取类囊体膜,BN-PAGE结合二项SDS-PAGE电泳表明,p TAC7定位于669k D的复合物中,与rpo B定位于669k D的PEP复合物的位置一致。这些结果证实,p TAC7与核心亚基紧密结合,是另一个PAP蛋白。另外,除了鉴定到PEP复合物组分中的蛋白外,我们还鉴定到叶绿体中的7个核糖体蛋白,2个分子伴侣蛋白及参与质体转录本加工有关的2个PPR蛋白。这些蛋白可能作为与p TAC7相互作用的候选蛋白。本论文为p TAC7的深入研究提供了理论基础。