茉莉素作为一种植物激素分子,在植物生长发育和防御反应中具有不可或缺的重要作用。已知茉莉素的功能包括有调控植物根的生长,调控叶片衰老、花粉发育、表皮毛的形成及诱导植物防御基因的表达等。在茉莉素信号途径中,茉莉素受体COI1蛋白可以与ASK1, Cullinl, Rbx1蛋白形成SCF蛋白复合体,并接收茉莉素信号,进而识别其底物JAZ1蛋白并使其被打上泛素标签从而被26s蛋白酶体识别而降解,从而释放下游转录因子开启茉莉素信号响应基因的表达,所以COI1蛋白在这一系列的反应中是不可或缺的,COI1蛋白功能的鉴定对解析JA信号途径具有重要意义,然而COI1蛋白的表达和纯化非常困难,且表达后不易保留其生物活性。针对这一问题,我们对COI1蛋白的表达纯化进行了一系列的摸索,且在这一基础上将方法延伸到其同源蛋白的表达及同类蛋白的表达上。我们首先构建了原核表达体系,但是通过蛋白表达检测发现蛋白大部分在包涵体中,为不可溶蛋白。而后我们构建了昆虫表达体系,在获得P1代病毒后,检测发现其可以表达,但是含量较低且不稳定。基于这一点,我们从与COI1蛋白互作的蛋白着手,将它们两两组合,一同转入昆虫细胞,比较COI1蛋白的表达情况,最终选定ASK1蛋白为其辅助蛋白,并且其生物活性不受到影响。在这一基础上,我们对蛋白的纯化条件进行了摸索。由于其自身携带有两种特异性标签6*His tag及Flag tag,分别比较使用这两种亲和介质的纯化所得蛋白的纯度、活性及成本等,然后确定使用Ni beads为COI1蛋白初步分离的介质。而后对目的蛋白进行了更进一步的精细分离。依次使用离子交换柱及分子筛,最大想限度的剔除杂蛋白。最后还将这一体系拓展到同源蛋白的表达,发现其具有可行性。