论文部分内容阅读
目的:研究17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查尔酮(17 ? methoxyl ? 7 ?hydroxy-benzene?furanchalcone，MHBFC)对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及其对NF-κB和炎症反应的影响。
方法:取心电图正常的SD大鼠，随机分为7组，每组10只，雌雄各半，即:假手术(Sham)组、心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)组、MHBFC低剂量(MHBFCL)组、MHBFC中剂量(MHBFCM)组、MHBFC高剂量(MHBFC H)组、溶媒(DMSO)组和吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组。各组大鼠尾静脉给药7天，末次给药后10min，通过结扎SD大鼠冠状动脉左前降支30min后，松开结扎再灌注60min构建心肌缺血再灌注损伤模型，观察MHBFC对心肌的保护作用及检测MHBFC对NF-κB及其调控的相关炎症因子的影响。再灌注60min后，测定下列各项指标:
1.EvansBlue/TTC双重染色法观察大鼠心肌梗死范围，按试剂盒说明检测血清MDA，T-SOD，CK-MB，Hyp，AST及GSH-Px水平;
2.ELISA法检测血清炎症因子IL-1β，IL-6和IL-10水平，RT-PCR法检测心肌组织MMP-9，ICAM，NF-κB及凋亡因子caspase-3和ANT1mRNA表达;
3.免疫组化法观察TNF-α，NF-κBp65和ICAM-1蛋白表达，westernblot法检测NIK/IKK/IκB/NF-κB信号通路蛋白表达。
结果:1.与MI/RI组比较，MHBFCM和MHBFCH组尾静脉给药预处理可明显缩小大鼠心肌梗死范围(P＜0.01或P＜0.05)，但各组间的心肌缺血范围差异无统计学意义(P＞0.05);MHBFC尾静脉给药预处理能提高血清T-SOD和GSH-Px水平，降低MDA，CK-MB，Hyp，AST水平;
2.与MI/RI组比较，MHBFCM和MHBFCH组能降低血清中IL-1β和IL-6水平(P＜0.01或P＜0.05)，MHBFC各给药组能提高IL-10水平(P＜0.01);MHBFC各给药组均能不同程度地提高ANT1mRNA的表达，并减少ICAM，NF-κB，MMP-9和caspase-3mRNA的表达(P＜0.01或P＜0.05);
3.免疫组化结果显示，与MI/RI组比较，MHBFC各给药组均能不同程度地下调TNF-α，NF-κBp65和ICAM-1蛋白的阳性表达(P＜0.01或P＜0.05);westernblot结果显示，MHBFC可以降低MI/RI所致的NIK、IKKβ及NF-κB的蛋白表达增多(P＜0.05或P＜0.01)，能增加IκBα的蛋白表达(P＜0.05)，且呈剂量依赖关系
结论:MHBFC对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有明显的保护作用，并呈一定的量效关系。其机制可能与其增强抗氧化酶活性,减少自由基对心肌的氧化损伤,减少细胞凋亡相关基因的表达，抑制NIK/IKK/IκB/NF-κB信号通路蛋白表达及减少其调控的相关炎症因子的释放等机制有关。
方法:取心电图正常的SD大鼠，随机分为7组，每组10只，雌雄各半，即:假手术(Sham)组、心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)组、MHBFC低剂量(MHBFCL)组、MHBFC中剂量(MHBFCM)组、MHBFC高剂量(MHBFC H)组、溶媒(DMSO)组和吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组。各组大鼠尾静脉给药7天，末次给药后10min，通过结扎SD大鼠冠状动脉左前降支30min后，松开结扎再灌注60min构建心肌缺血再灌注损伤模型，观察MHBFC对心肌的保护作用及检测MHBFC对NF-κB及其调控的相关炎症因子的影响。再灌注60min后，测定下列各项指标:
1.EvansBlue/TTC双重染色法观察大鼠心肌梗死范围，按试剂盒说明检测血清MDA，T-SOD，CK-MB，Hyp，AST及GSH-Px水平;
2.ELISA法检测血清炎症因子IL-1β，IL-6和IL-10水平，RT-PCR法检测心肌组织MMP-9，ICAM，NF-κB及凋亡因子caspase-3和ANT1mRNA表达;
3.免疫组化法观察TNF-α，NF-κBp65和ICAM-1蛋白表达，westernblot法检测NIK/IKK/IκB/NF-κB信号通路蛋白表达。
结果:1.与MI/RI组比较，MHBFCM和MHBFCH组尾静脉给药预处理可明显缩小大鼠心肌梗死范围(P＜0.01或P＜0.05)，但各组间的心肌缺血范围差异无统计学意义(P＞0.05);MHBFC尾静脉给药预处理能提高血清T-SOD和GSH-Px水平，降低MDA，CK-MB，Hyp，AST水平;
2.与MI/RI组比较，MHBFCM和MHBFCH组能降低血清中IL-1β和IL-6水平(P＜0.01或P＜0.05)，MHBFC各给药组能提高IL-10水平(P＜0.01);MHBFC各给药组均能不同程度地提高ANT1mRNA的表达，并减少ICAM，NF-κB，MMP-9和caspase-3mRNA的表达(P＜0.01或P＜0.05);
3.免疫组化结果显示，与MI/RI组比较，MHBFC各给药组均能不同程度地下调TNF-α，NF-κBp65和ICAM-1蛋白的阳性表达(P＜0.01或P＜0.05);westernblot结果显示，MHBFC可以降低MI/RI所致的NIK、IKKβ及NF-κB的蛋白表达增多(P＜0.05或P＜0.01)，能增加IκBα的蛋白表达(P＜0.05)，且呈剂量依赖关系
结论:MHBFC对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有明显的保护作用，并呈一定的量效关系。其机制可能与其增强抗氧化酶活性,减少自由基对心肌的氧化损伤,减少细胞凋亡相关基因的表达，抑制NIK/IKK/IκB/NF-κB信号通路蛋白表达及减少其调控的相关炎症因子的释放等机制有关。