非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)是恶性淋巴瘤的一大类型,在最常被诊断的癌症中排名第五。抗CD20单克隆抗体是一个新的有效抑制肿瘤细胞增长的治疗方案,在治疗NHL中的地位逐步提高,特别是美罗华的上市应用,为NHL的治疗起到了非常重要的作用。优化动物细胞培养工艺,提高目的蛋白的产量及批次间稳定的糖型分布,是目的蛋白实现产业化、提升国内外市场竞争力的关键和核心所在。首先,通过基础培养基和补料培养基的筛选实验,确定基础培养基和补料培养基及其流加比例。结果如下:由于不同的基础培养基和补料培养基的搭配对蛋白的质量(SEC、CEX和糖型分布)结果没有显著的影响,但SFM4搭配2×103A(含30g/L YM001)和BR7的蛋白产量最高,因此选择此搭配进行后续研究。但四个摇瓶表达目的蛋白糖型分布的结果与标准品有较大差异,主要表现G0F峰面积比例较标准品偏高23%左右,G1F、G2F峰面积比例分别较标准品偏低17%和5%左右。针对G0F偏高,G1F、G2F偏低的情况,设计DoE完全析因实验,通过实验发现氯化锰对该蛋白产量、糖型分布没有显著的影响作用,尿苷和半乳糖的添加能显著影响蛋白产量和其糖型分布情况,采用JMP软件分析最终确定细胞培养工艺为:基础培养基SFM4中添加4.5mM的尿苷和15.5mM的半乳糖,补料培养基为2×103A(含30g/L YM001)和BR7。最后,在摇瓶优化结果的基础上,采用了2个平行反应器进行验证放大实验,初始接种密度为0.50~0.70×10~6 cells/mL,反应器条件下的培养参数为:培养温度为36.5℃,pH 6.9±0.2,溶氧40%,SFM4基础培养基里添加4.5 mM尿苷和13.5 mM半乳糖,补料培养基为2×103A(含30g/L YM001)和BR7,培养14天收获,蛋白产量在2.4g/L左右,SEC、CEX和糖型分布的各项指标均与原研药接近。