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由于中药本身的复杂性、科学技术条件、研究思路和方法等因素的局限,现行中药质控模式和方法不仅难以有效地控制和评价中药的质量,更难以反映其安全性和有效性。本文通过建立基于肠吸收的质量评价指标选择方法,为中药质量控制指标的选择提供依据。
基于“化学成分群>>吸收成分群>药效成分(群)”的假说,设计以吸收成分群为质量控制指标选择的候选对象。目前,体内吸收成分研究方法繁琐,因此拟以简单、快速的体外吸收模型代替体内吸收成分的研究,考察“从体外模型吸收成分(群)中选取质量控制指标”的技术可行性。我们采用体外模型--肠外翻模型进行研究,并将其与体内模型--肝门静脉取血比较,寻找两者的相关性,探讨体外模型代替体内模型确定吸收成分的可行性。同时可以通过检测肠外翻实验中的样品推测可能吸收入血的成分,从而寻找复杂体系--中药或中药复方的药效物质基础。
中药龙胆和秦艽为龙胆科龙胆属植物代表,含有多种活性成分,尤其富含具有保肝作用的环烯醚萜苷类成分。本文以龙胆和秦艽为研究对象,采用体内模型法,大鼠口服给药后不同时间在门静脉取血,血样采用HPLC进行检测;同时采用大鼠外翻肠囊模型,分别收集3个质量浓度龙胆和秦艽提取物给药后不同时间点的肠囊液样品,并以龙胆苦苷、马钱苷酸、当药苦苷和当药苷为代表成分,采用HPLC对这4种成分进行检测,分别计算其累计吸收量和吸收速率。比较体内外模型吸收成分,推测可能入血的成分。
研究结果发现,龙胆吸收进入血液的成分为2种,成分在给药后5min进入血液;马钱苷酸呈双峰,龙胆苦苷在1.5h达最高吸收峰。龙胆中有6种主要成分可进入肠囊,龙胆苦苷和马钱苷酸在15min能检测到,当药苦苷和当药苷在90min后可检测到;不同质量浓度的龙胆提取物中龙胆苦苷、马钱苷酸、当药苦苷和当药苷在各肠段均为线性吸收,R2均大于0.9,符合零级吸收;龙胆苦苷和当药苦苷在空肠中的吸收速率常数(Ka)随着剂量增加而增加(P<0.05),符合被动吸收,而在回肠中大、中剂量的Ka值无显著差异,且均高于小剂量,符合主动吸收;当药苷在空、回肠中大、中剂量的Ka值无显著差异,且均高于小剂量,符合主动吸收;马钱苷酸在回肠与空肠中的Ka值随着剂量增加而增加(P<0.05),符合被动吸收。结果表明,2种入血成分龙胆苦苷和马钱苷酸可用HPLC在肠囊吸收液中检出,吸收速度均很很快,说明两种模型有很好的相关性。
秦艽吸收进入血液的成分为2种,马钱苷酸和龙胆苦苷在给药后5min进入血液,其中马钱苷酸吸收进入血液的量很低。秦艽中有7种主要成分可进入肠囊,龙胆苦苷和马钱苷酸在15min能检测到;不同质量浓度的秦艽提取物中龙胆苦苷、马钱苷酸、当药苦苷和当药苷在各肠段均为线性吸收,R2均大于0.9,符合零级吸收;各成分在回肠和空肠中的吸收速率常数(Ka)随着剂量增加而增加(P<0.05),符合被动吸收,结果表明,2种入血成分龙胆苦苷和马钱苷酸可用HPLC在肠囊吸收液中检出,吸收速度均很快,说明两种模型有很好的相关性。
以上结果说明,体外模型可以部分代替体内模型确定吸收成分(群),肠外翻模型简便易操作,因此基于肠吸收的质量评价指标选择方法可以用于中药吸收成分(群)的研究,为中药质量控制指标的选择提供依据。