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目的：
1.观察强心苷类药物(地高辛、洋地黄毒甙、哇巴因等)对常用血液肿瘤细胞株及正常人骨髓单个核细胞增殖和凋亡的影响。
2.初步探索强心苷抗肿瘤作用可能的机制。
方法：
1.培养血液肿瘤细胞株(Raji、NB4、Jurkat、RPMI8226、Kasumi-1)及正常人骨髓单个核细胞，培养基中分别加入不同浓度地高辛(2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、30ng/ml、50ng/ml)，哇巴因(0.1nM、1nM、20nM、50nM)，洋地黄毒甙(10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml、50ng/ml)，干预24小时、48小时、72小时后，用CCK-8试剂盒检测强心苷类药物的细胞毒性并确定药物作用IC50，选择适当的药物浓度进一步实验。
2.根据CCK-8结果筛选药物最适浓度，EdU流式细胞仪法检测三种药物最适浓度干预细胞48小时后细胞增殖情况。
3.EdU免疫荧光显微镜观察药物干预最敏感细胞株48小时后细胞增殖情况。
4.Annexin-V/PI双染法检测三种药物最适浓度干预细胞48小时后细胞凋亡情况。
5.PI单染法检测三种药物最适浓度干预细胞48小时后细胞周期情况。
结果：
1.CCK-8结果：与空白对照组相比，不同浓度地高辛、洋地黄、哇巴因分别作用细胞24、48、72小时后，对Raji、NB4、Jurkat、8226、Kasumi-1细胞株具有不同程度抑制增殖的作用；上述药物作用HL-60细胞株24小时，表现出轻微促增殖作用。
2.三种药物作用：Raji细胞48小时后，IC50分别为(地高辛：68.77±7.69nM、哇巴因：41.68±7.99nM、洋地黄毒甙：45.58±26.44nM)，而其它细胞株的IC50均在100nM左右。
3.地高辛30ng/ml、洋地黄毒甙20ng/ml作用于Raji细胞株48小时后，可明显抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、改变细胞周期分布：1)总凋亡率较空白对照组增高，差异具有统计学意义(p<0.05)；2)EdU流式细胞仪法检测发现处于增殖阶段的细胞占总细胞的比率下降，与对照组相比有显著性差异(p<0.05)；EdU荧光显微镜检测处理组荧光强度减弱；3)与对照组相比，处于S期的细胞较对照组为少(p<0.05)，而处于G2/M期细胞比率显著增高(p<0.05)，说明细胞周期被阻滞在G2/M期。哇巴因20nM对本研究中所用所有细胞株无抑制增殖、促进凋亡作用，哇巴因50nM可抑制Raji细胞株增殖。
4.地高辛30ng/ml、洋地黄毒甙20ng/ml、哇巴因20nM作用于其它肿瘤细胞株(Jurkat，HL-60，Kasumi-1，NB4，RPMI8226)及原代培养的正常人骨髓单个核细胞48小时后，检测细胞增殖率、总凋亡率、细胞周期分布情况，强心苷组与对照组相比无显著性差异(p>0.05)。尚未能获得三种药物作用于正常人骨髓单个核细胞的IC50值。
结论：
1.本试验所用强心苷类药物可抑制体外培养的肿瘤细胞株增殖。
2.相对于其它肿瘤细胞株，Burkitts淋巴瘤Raji细胞株对地高辛、洋地黄、哇巴因的敏感性最高。
3.地高辛30ng/ml、洋地黄毒甙20ng/ml、哇巴因20nM不影响正常人骨髓单个核细胞增殖、凋亡及细胞周期分布。
4.洋地黄毒甙等强心苷类药物可抑制肿瘤细胞株增殖，促进肿瘤细胞凋亡，使肿瘤细胞周期阻滞在G2/M期，而不影响正常人骨髓单个核细胞，具有潜在的临床应用前景。