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目的:p73基因是1997年被发现的p53基因家族新成员之一,该基因在结构和功能上与p53基因有高度相似性,被认为是继p53基因之后的重要肿瘤抑癌基因。与p53不同的是,p73基因有多种变异体,△Np73(deltaNp73)是其中p73缺失N末端反式激活区域的一种,可以对p53及p73的功能进行负性调节,与人类肿瘤的发生发展关系密切。随着对肿瘤细胞凋亡研究的深入,△Np73日益引起人们的关注。食管癌的发生发展是一个复杂、多步骤、进行性的发展过程,涉及多种基因的调控作用。然而,食管癌的发病原因尚不十分明确。本研究应用Rt-PCR及流式细胞术(FCM),从转录水平和翻译水平检测ANp73在食管癌组织中的表达状况,试从分子生物学角度探讨△Np73基因在食管鳞状细胞癌发生发展过程中的意义。
方法:本研究中使用的组织标本取自于2005年1月至2006年12月在河北医科大学第四医院胸外科住院手术的47例食管癌患者癌组织及与其相对应的癌旁组织(距肿瘤边缘约2cm)和正常食管组织(距肿瘤边缘>5cm)。所有肿瘤组织均经病理学确诊为鳞状细胞癌,癌旁组织证实为不典型增生,正常食管组织证实为炎症或正常鳞状细胞。全部病例术前均未行放化疗,其中男性36例,女性11例;年龄43~74岁,平均年龄58.91±7.61岁;吸烟史>400年支者23例,<400年支者24例;有饮酒史者18例,无饮酒史者29例;家族肿瘤史阳性者17例,阴性者30例;肿瘤组织大小:>15cm者14例,≤5cm者33例;分化程度:高、中分化者40例,低分化者7例;无淋巴结转移者27例,有转移者20例;临床分期(按1997年UICC的TNM分期):Ⅰ、Ⅱ期者13例,Ⅲ、Ⅳ期者34例。
结果:
1.△Np73mRNA在食管癌、癌旁及正常食管组织中的表达:47例食管癌组织中△Np73mRNA的RI值为0.607l±0.2674,而相对应的癌旁组织和正常食管组织中分别为0.3750±0.1891、0.3469±0.2037。癌组织中△Np73mRNA 表达水平明显高于癌旁组织和正常食管组织,在统计学上存在显著性差异。正常食管组织与癌旁组织之间△Np73mRNA表达水平无明显差异。
2.△Np73mRNA的表达水平与食管癌临床病理特征的关系:T<,1、2>期食管癌患者与T<,3、4>期患者的食管癌组织中△Np73mRNA表达水平分别为 0.7918±0.3138和0.5287±0.2038,经统计学处理,两者存在显著性差异。但△Np73mRNA的表达水平与患者的性别、年龄、饮酒史、吸烟史、家族史、肿瘤大小、癌细胞的分化程度、有无淋巴结转移及TNM分期等因素无关。
3.△Np73蛋白在食管癌、癌旁及正常食管组织中的表达:47例食管癌组织中有39例(83.0%) △Np73蛋白表达阳性,相对应癌旁组织有15例(31.9%)表达阳性,食管正常组织中有23例(48.9%)表达阳性。食管癌组织中△Np73表达阳性率与癌旁组织、正常组织比较,具有显著性差异;而癌旁组织中△Np73表达阳性率与相对应正常食管组织进行比较,无差异。定量分析食管癌组织中△Np73蛋白FI值为1.2036±0.3120,而相对应的癌旁组织和正常食管组织中分别为0.8904±0.3662、1.0000±0.4129。癌组织FI值明显高于癌旁组织和正常组织,经统计学处理有显著性差异。而正常食管组织与癌旁组织之间无统计学差异。
4.△Np73蛋白表达与食管癌临床病理特征的关系:T<,1、2>期食管癌患者与T<,3、4>期食管癌患者的食管癌组织中,△Np73的表达水平分别为1.4037±0.1964和1.1357±0.3281,经统计学处理,两者存在显著性差异。但是,其蛋白表达水平与患者的性别、年龄、饮酒史、吸烟史、家族史、肿瘤大小、癌细胞的分化程度、有无淋巴结转移及TNM分期等因素无关。
5.Spearman相关检验:T<,1、2>期食管癌患者与T<3、4>期食管癌患者的食管癌组织中,△Np73mRNA表达与食管癌浸润深度呈负相关,r=-0.374,P<0.05;T<,1、2>期食管癌患者与T<,3、4>期食管癌患者的食管癌组织中,△Np73 蛋白表达与食管癌浸润深度呈负相关。
结论:
1.ANp73mRNA和蛋白在食管癌组织中的表达水平是一致的,均高于癌旁和正常食管组织。
2.在浸润深度上,T<,1、2>期食管癌组织中,△Np73 mRNA和蛋白表达水平均高于T<,3、4>期;食管癌组织中△Np73 mRNA和蛋白表达水平与食管癌的浸润深度均呈负相关。
3.食管癌组织中,△Np73 mRNA和蛋白表达水平与患者的性别、年龄、饮酒史、吸烟史、家族史、肿瘤大小、癌细胞的分化程度、有无淋巴结转移及TNM分期等因素无关。
4.△Np73基因的表达变化可能与食管癌的发生发展有关。