PRRSV-NP单克隆抗体的制备及其直接荧光方法建立

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:seacloudnemo
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的病毒性传染病,能引起母猪的繁殖障碍:返情流产、死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔猪呼吸障碍等,并造成仔猪的死亡淘汰,给养猪业造成重大的经济损失。该病毒嗜好在肺泡巨噬细胞、单核细胞等免疫细胞中增殖,损害猪体免疫功能,在猪体内带毒时间可长达16个月,导致免疫抑制,常造成混合感染;特别是PRRSV同PCV2的共同感染在猪场中非常普遍,严重影响母猪的繁殖性能与仔猪的成活率。因此,PRRSV有效准确的诊断对于检测猪场的PRRSV隐性感染和混合感染,有效控制猪场的PRRS具有重要的意义。由本实验室构建的PGEX-6P-PRRSV-N质粒,表达PRRSV-NP,经纯化后免疫小鼠,通过细胞融合的方法制备杂交瘤细胞,根据建立的间接ELISA筛选法,筛选到2株阳性杂交瘤细胞N-13,N-29。将阳性杂交瘤细胞免疫小鼠,制备小鼠腹水,其中N-13腹水效价为10000,N-29腹水效价为1:12000;选择效价高的N-29抗体,通过间接免疫荧光试验及间接ELISA法对其特异性进行鉴定,结果表明N-29抗体与猪伪狂犬病毒(PRV),猪腹泻病毒(PEDV),猪圆环病毒(PCV)均无交叉反应;Western blot结果表明该单抗具有良好的反应原性;因此制备的该单克隆抗体可以用于PRRSV的临床检测,应用于免疫荧光方法,竞争ELISA及免疫层析技术。为了建立一种快速的PRRSV诊断方法,本研究以纯化的PRRSV-TJ-PGEX-6P-N重组蛋白处理抗原免疫BALB/C小鼠,利用淋巴瘤细胞融合技术,包被带有His标签的PRRSV-NP,通过间接ELISA方法筛选到两株可以稳定分泌的N蛋白特异性单克隆抗体,命名为N-13、N-29。通过间接ELISA方法,Western blot与直接免疫荧光方法对其进行鉴定,并测定其亲和常数。腹水效价分别为1:10000与1:12000,选择腹水效价高的N-29进行纯化标记,并对标记抗体的特异性、敏感性与保存期进行鉴定;通过DFA条件的摸索,建立了一种敏感的DFA诊断方法,并对其和PRRSV分离鉴定常用的CPE观察法进行比较。结果表明DFA方法更加准确,可以作为实验室病毒分离鉴定和猪生产中该疾病诊断的有效手段。
其他文献
严肃党内政治生活是马克思主义政党的本质要求,是总结我党经验教训的必然之举,是新时期加强党的建设的实然之势。新时期严肃党内政治生活要以认真贯彻执行民主集中制为根本,
经济全球化与经济转型的发展,对党校的经济学教学提出了更高要求。党校经济学教学与普通高校相比有其特殊规定性,且存在教学内容脱离实际、教学对象指向不明、教学方案空洞泛
该文采用问卷调查法、文献资料法、数理分析法、逻辑分析法等研究方法,对武汉体育学院体育教育专业学生进行调查,以了解该校体育教育专业学生的择业倾向和学习行为。调查结果
目的阐述介入手术中麻醉管理的重要性。方法回顾性分析2011年4月至2015年4月期间接受3、4级介入手术患者共24 382例,根据术中麻醉方式分为静脉全身麻醉联合喉罩或气管插管机
我国古代言意论在宋代文论视野中的展开主要体现在两大层面:一是言意之辩论,包括言能尽意论和言不尽意论两个论说维面;二是言意构合论,包括意在言外论、意主辞宾论及言意相互
孔子是我国传统社会"私学"教育的开创者和奠基人。在教育过程中,孔子对教师观、学生观、师生观及知行观等诸多领域都有所思考,形成了丰富的教育思想。这些教育思想既对传统社
分析了永磁同步电动机(PMSM)产生齿槽转矩的原因,归纳了目前削弱永磁电动机齿槽转矩常用的方法,提出在转子上设辅助孔来削弱齿槽转矩的新方法。以一台12槽8极的PMSM为研究对象,
集合覆盖问题是图数据管理中的热点问题之一,尤其是在电网企业的变革中,电网物资的有效快速周转、电力系统网络安全的检修、电路的合理化设计等,越来越多的实际问题,利用集合
地域特征对山水画创作的影响不仅体现在画家对自然物象的描绘表现上,还体现在作品精神内涵对特殊地域文化的反映上。文中地域特征不仅包括自然地理特征,更包括人文地理特征,
以2009年天津市武清区土地利用现状更新调查为例,总结出在ArcGIS平台下进行土地利用现状数据库更新的方法、路线以及各环节的具体实现过程。