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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的病毒性传染病,能引起母猪的繁殖障碍:返情流产、死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔猪呼吸障碍等,并造成仔猪的死亡淘汰,给养猪业造成重大的经济损失。该病毒嗜好在肺泡巨噬细胞、单核细胞等免疫细胞中增殖,损害猪体免疫功能,在猪体内带毒时间可长达16个月,导致免疫抑制,常造成混合感染;特别是PRRSV同PCV2的共同感染在猪场中非常普遍,严重影响母猪的繁殖性能与仔猪的成活率。因此,PRRSV有效准确的诊断对于检测猪场的PRRSV隐性感染和混合感染,有效控制猪场的PRRS具有重要的意义。由本实验室构建的PGEX-6P-PRRSV-N质粒,表达PRRSV-NP,经纯化后免疫小鼠,通过细胞融合的方法制备杂交瘤细胞,根据建立的间接ELISA筛选法,筛选到2株阳性杂交瘤细胞N-13,N-29。将阳性杂交瘤细胞免疫小鼠,制备小鼠腹水,其中N-13腹水效价为10000,N-29腹水效价为1:12000;选择效价高的N-29抗体,通过间接免疫荧光试验及间接ELISA法对其特异性进行鉴定,结果表明N-29抗体与猪伪狂犬病毒(PRV),猪腹泻病毒(PEDV),猪圆环病毒(PCV)均无交叉反应;Western blot结果表明该单抗具有良好的反应原性;因此制备的该单克隆抗体可以用于PRRSV的临床检测,应用于免疫荧光方法,竞争ELISA及免疫层析技术。为了建立一种快速的PRRSV诊断方法,本研究以纯化的PRRSV-TJ-PGEX-6P-N重组蛋白处理抗原免疫BALB/C小鼠,利用淋巴瘤细胞融合技术,包被带有His标签的PRRSV-NP,通过间接ELISA方法筛选到两株可以稳定分泌的N蛋白特异性单克隆抗体,命名为N-13、N-29。通过间接ELISA方法,Western blot与直接免疫荧光方法对其进行鉴定,并测定其亲和常数。腹水效价分别为1:10000与1:12000,选择腹水效价高的N-29进行纯化标记,并对标记抗体的特异性、敏感性与保存期进行鉴定;通过DFA条件的摸索,建立了一种敏感的DFA诊断方法,并对其和PRRSV分离鉴定常用的CPE观察法进行比较。结果表明DFA方法更加准确,可以作为实验室病毒分离鉴定和猪生产中该疾病诊断的有效手段。