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目的:探究槐耳清膏对三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231和BT-549的形态学、增殖、侵袭、细胞周期和自噬的影响。方法:1.体外培养MDA-MB-231和BT-549三阴型乳腺癌细胞系,光学显微镜观察不同浓度槐耳清膏(4mg/ml、8mg/ml)作用乳腺癌细胞株48小时后的形态学变化。2.通过CCK-8实验观察不同浓度槐耳清膏(2mg/ml、4mg/ml、8mg/ml、16mg/ml)作用不同时间(24h、48h)对三阴乳腺癌细胞增殖的影响。3.Transwell实验观察槐耳清膏对三阴乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响。4.流式细胞仪检测三阴乳腺癌细胞在不同浓度槐耳清膏作用下的细胞周期变化。5.CCK-8实验观察三阴乳腺癌细胞在槐耳清膏和自噬抑制剂联合作用下细胞增殖情况。6.蛋白质印迹法(Western Blot)观察不同浓度槐耳清膏作用下三阴乳腺癌细胞LC-3II/LC-3I表达量比值。结果:1.槐耳清膏可以促进MDA-MB-231和BT-549细胞出现凋亡和坏死,对两株细胞的增殖具有抑制作用,并且具有剂量-时间效应关系。MDA-MB-231细胞在24h和48h下的IC50值分别是8.92mg/ml、5.52mg/ml,BT-549细胞在24h和48h下的IC50值分别是8.41mg/ml、4.75mg/ml。相同细胞不同时间之间抑制作用的差异具有统计学意义,但是两株细胞之间没有明显差异。2.Transwell实验中,我们观察到正常培养的MDA-MB-231和BT-549细胞24h内可以大量穿透铺有或未铺有Matrigel胶的小室薄膜层;4mg/ml的槐耳清膏作用24h的两株乳腺癌细胞几乎不能穿透小室薄膜。3.4mg/ml和8mg/ml槐耳清膏分别培养细胞24h、48h后检测细胞周期,MDA-MB-231细胞的G0/G1期呈下降趋势,S期出现上升趋势,但是差异无统计学意义。BT-549细胞G0/G1期呈下降趋势,S期呈上升趋势,其中8mg/ml槐耳清膏作用24h和48h,S期比例分别达到34%和33%,相比对照组的15%具有统计学差异。4.使用自噬抑制剂CQ和3-MA培养MDA-MB-231和BT-549细胞48h,通过CCK-8实验计算吸光度,实验组和对照组的细胞增殖无明显差异。在4mg/ml槐耳清膏中加入CQ和3-MA培养两株细胞48h,对比只用槐耳清膏的对照组,加入自噬抑制剂的实验组吸光度略有增长,但差异无统计学意义。5.通过Western Blot实验分别检测正常培养的MDA-MB-231细胞、BT-549细胞和4mg/ml槐耳清膏培养的两株细胞的LC-3II/LC-3I表达量比值,MDA-MB-231细胞对照组LC-3II/LC-3I值为1.63,实验组为2.0;BT-549细胞对照组为1.09,实验组为1.61,差异具有统计学意义。结论:1.槐耳清膏对MDA-MB-231细胞和BT-549细胞的增殖和侵袭、迁移具有抑制作用。抑制作用具有时间-剂量效应关系。2.槐耳清膏可以阻滞BT-549细胞周期在S期,对MDA-MB-231细胞周期所产生的阻滞作用无统计学差异。3.槐耳清膏对MDA-MB-231细胞和BT-549细胞的抑制作用可能和增强细胞自噬有关。