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枸杞子是茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实,具有滋肾补肝、润肺明目等功能。其应用历史悠久,为我国著名的药食共用产品。近年来,对枸杞子的药理作用进行了深入研究,发现枸杞子能增强机体免疫力,抗肿瘤,防衰老增加造血功能等。根据大量的文献报道,枸杞多糖(LBP)是枸杞子的主要生物活性成分。由于活性多糖在生命科学中的重大研究价值,所以活性多糖一直是学术界倾注极大热情的重大主题。因此,本研究以宁夏产的枸杞子为研究对象,从中提取枸杞多糖进行深入研究,为今后更深入地研究枸杞多糖的化学结构和活性功能等工作提供基础资料。
本论文的研究成果主要有以下几部分:
(1)确定了多糖的最优提取条件。采用优于传统回流提取的超声波辅助提取,以蒸馏水为溶剂在250W下浸提30min,料液比为1:10。多糖得率达2.54%;
(2)枸杞多糖最佳沉淀方法:以乙醇为沉淀剂,添加浓缩液4倍体积的乙醇,醇沉时间为4h;
(3)采用红外和气质联用技术分析了枸杞水溶性多糖中单糖组成及其含量。结果表明,枸杞多糖里含有的单糖包括阿拉伯糖,鼠李糖,木糖,甘露糖,半乳糖,葡萄糖,其含量比例为13.19:3.41:2.92:10.53:18.92:9.82;
(4)依次用苯酚-硫酸法、咔唑-硫酸法及元素分析法测定LBP中的中性糖、糖醛酸及蛋白质含量。
以葡萄糖为对照品,测得LBP中的中性糖含量为64.5l%,回归方程为y=0.0184x+0.0844,R2=0.9953,线性范围为7~49 μg/ml:以葡萄糖醛酸为对照品,测得LBP中的糖醛酸含量为12.08%,回归方程y=0.1626x+0.0028,R2=0.9989,线性范围为10~60μg/ml;元素分析法测得LBP中的蛋白质含量为7.06%:
(5)研究了不同浓度LBP粗品和LBP对牛肺动脉内皮细胞(CPAE)增殖和迁移的影响,结果证实了枸杞多糖能有效抑制血管内皮细胞的增殖和迁移。枸杞浓度达到400μg/ml时,对细胞增殖的抑制率达到80%。在枸杞多糖浓度为5mg/ml的情况下,能够最有效的发挥抑制内皮细胞定向迁移的作用。