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通过向恶性肿瘤患者体内注入某种特异性亲肿瘤的放射性标记药物,以实现对恶性肿瘤的定位和有效治疗,一直是放射性药物和核医学领域研究的热点。单克隆抗体作为特异性载体,已经在放射免疫显像和放射免疫治疗中得到广泛的应用,并且在预定位显像及治疗中取得令人鼓舞的成果。近年来,随着基因研究的发展、反义技术的出现,用放射性标记反义寡核苷酸探针,经体内核酸杂交而进行的反义显像和反义治疗更得到极大的关注,成为继放射免疫显像和治疗之后又一个研究重点。 目前已经有多种寡核苷酸被应用于反义研究中,包括DNA,硫代磷酸寡核苷酸(sDNA),肽核酸(PNA)等,这些寡核苷酸虽然有各自的特点,但也都存在某种不足,如稳定性差、不能耐受核酸酶的降解、血浆蛋白结合率高等,从而限制了其应用。Morpholino寡核苷酸是一种人工合成的寡核苷酸类似物,与sDNA,PNA等其它寡核苷酸相比,具有稳定性好、 $。fkL#4+q4WA一特异性高、结合稳定、血浆蛋白结合率低等特点。除了作为反义探针在基因研究中得到应用外,作为放射性核素的载体,Morpholino寡核昔酸己经被应用于预定位肿瘤显像,并取得预期的结果。由于其良好的稳定性及药代动力学性质,被认为是潜在的肿瘤放射性诊断及治疗药物。 mY及’册Re均为目前应用较多的治疗性核素,二者均具有合适的半衰朋及 p射线能量。由于卯Y jJ纯 p发射体,探测较为困难,因此常与化学性质相似的’‘’In联合应用,利用”’In yJ Y射线观察肿瘤的摄取及计算辐射剂量。”汝e在释放2.11*eV的p射线的同时,还同时释放适合显像的155KeV的Y射线(占15%L 而且’%Re可以很方便地通过’册W/’肌Re发生器得到,在应用上具有独特的优势。 目前标记寡核各酸多采取间接标记法,DOTA及MAG3被认为是目前较好的双功能螫合剂。与**砒相比,*OTA与二价及三价的金属离于”’In、卯Y等结合后具有较高的稳定性,可以避免放射性核素的脱落对正常组织造成的损伤。MAG。己经被广泛应用在””To标记抗体、多肽等生物分于,并且在标记寡核昔酸中也得到应用。 本课题以 DOTA及 MAG3做为双功能螫合剂,分别用”‘In/’Y/皿奴e和的”To四种放射性核素标记Morpholino寡核昔酸,检测标记物的稳定性及生物活性,并探讨其在正常小鼠的生物分布,为Morpholino寡核昔酸在预定位治疗中的应用做准备。材料与方法 长度为25个碱基的单链Morpholino寡核昔酸,通过3’末端的氨基分别与双功能螫合剂DOTA或MAG3耦联。通过对不同标记条件下结果的分析,确定上述四种核素的最佳标记条件/’Y的标记完全按照”‘In的标记条件进行,‘%Re的标记则在参考的”v的标记条件下,进行了较大的忧化。四种核素标记完成后,用高效液相色谱及即时簿层层析检测其室温下在生理盐水及 3 7”C在新鲜人血清中的稳定性。利用与高分子聚合物交联的互补链Morpholino检测其分于杂交活性,并了解其在正常鼠的生物分布及药代动力学特性。 4 $。14k#4+qtfL一结 果1.HPLC、ITLC及 CI 反相柱分析证实,Mofpholinos寡核昔酸可以与 双功自螫合齐DO“及MAG3耦联,并被”’Ill、”Y、’‘’RC、和””’兀 四种放射性核素成功标记。2.上述四种核素标记物在HPLC放射性图谱上均表现为锐利的单峰,在 加入与高分子聚合物交联的互补链Morpholino后,放射性前移到高分 子位置。3.HPI。C证实,’‘’In和”’”To标记的MORF在生理盐水及新鲜人血清中 72h保持稳定。4.卯Y标记的MORF在HPLC上出现随时间增加的低分子量放射性峰, 证实为p射线所导致的标记物辐射分解。5.“SRe标记物在 HPLC上的放射性回收率随时间增加而降低,初步确定 为氧化作用所导致的’‘妆e脱落。6.耦联外源性螫合基团及标记不同种类的核素,对MORF的分于杂交活 性无影响。7,生物分布显示,放射性标记的MORF主要通过肾脏排泄。8.除’%Re在胃及甲状腺中分布较高外,四种标记物的生物分布无显著差 异。结 论1.末端经氨基修饰的MOgr可以通过耦联外源性螫合基团被多种核素标 记。2.化学修饰及放射性标记对MORF分于的稳定性和生物活性无影响。3.对于叨Y和’‘’Re标记MORF,在注射前应采用适当方法避免辐射分解 和氧化作用所导致的稳大性下降。4.四种标记物的生物分布无显著差异,化学修饰剂及放射性标记对生物 5 第。军医人甘傅士香位讼式 分布无影响,螫合剂对药代动力学有一定的影响。5.本实验所采用的标记方法适合诊断及治疗性核素标记Morpholino寡核 昔酸,为继后的预定位治疗提供了放射性药物的实验基础。