论文部分内容阅读
膜迷路内淋巴为高钾低钠的溶液,其离子浓度与细胞内液相似,而外淋巴则为低钾高钠的溶液。内、外淋巴的液体成分保持动态平衡,对于维持内耳的正常功能具有重要的意义。如果内、外淋巴离子失衡,可能造成内耳内环境紊乱,从而引发某些内耳疾病,如膜迷路积水,即为内淋巴的分泌过多/吸收障碍所致,也是梅尼埃病（Meniere’s disease,MD）的重要发病原因。目前对内淋巴K+转运机制的研究较多,而对Na+和H2O的转运机制却知之甚少。 对肾、肺、脑等组织的研究表明,上皮钠通道（EpitheliaI Sodium Channel,ENaC）是调节上皮Na+转运的限速分子,且ENaC的表达受SGK1（Serum and glucocorticoidinducible kinasel）和Nedd4（Neural precursor cell-expressed,developmentally downregulated gene）的调节,而水通道蛋白（Aquaporin,AQP）则是调节上皮细胞H2O转运的重要分子。为探讨ENaC和AQP分子在内耳的表达及其调节机制,本实验按如下三部分进行研究。第一部分采用免疫组化法,以特异性多克隆抗体定位观察大鼠和豚鼠内耳组织中ENaC、SGK1和Nedd4异构体蛋白分子的表达,并用αENaC和SGK1的cDNA质粒体外转录合成cDNA探针,以原位杂交的方法观察内耳组织中αENaC和SGK1基因mRNA的表达分布。第二部分以双侧肾上腺切除大鼠为模型,观察该模型动物的听功能变化、血管纹超微结构变化,并用Western blot和RT—PCR方法观察醛固酮对αENaC和SGK1表达的调节作用,了解醛固酮与ENaC调节和内耳功能形态学问的关系。第三部分用免疫组织化学法观察内耳组织中AQP1～4亚型分子的表达,为进一步研究其在内淋巴调节中的作用奠定基础。 实验的主要结果如下: 1.在豚鼠内耳组织中,ENaC的α、β、γ亚基蛋白和SGK1蛋白表达于除血管纹外的耳蜗组织中,但αENaC在螺旋神经节的表达呈阴性,而Nedd4异构体则表达于包括血管纹的耳蜗各个区域中。在内淋巴囊上皮细胞和上皮下组织中,ENaC、SGK1、Nedd4都呈阳性表达。αENaC mRNA和SGK1 mRNA表达于耳蜗血管纹、螺旋缘、螺旋韧带下端及内淋巴囊中。