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目的:以古尔班通古特沙漠为研究区,培养分离沙漠微藻,通过形态学特征和分子生物学手段对分离藻种进行物种鉴定,然后对其总脂含量及其油脂制备生物柴油的脂肪酸甲酯组分进行分析测定,筛选含油量高,适合作为制备生物柴油原料的藻种。 方法:通过液体BBM培养基将采集沙样进行混合培养,运用96孔板有限稀释法分离藻种,设计绿藻门的18SrDNA兼并引物及5.8SrDNA-ITS特异性引物,分别对分离的单藻种进行分子鉴定。将单藻种进行大量培养后获得的藻液经冷冻干燥成藻粉,通过分光光度法测定其粗脂含量,气相色谱分析其油脂制备生物柴油的脂肪酸甲酯组分,进行比较筛选出含油量较高,且生物量较大的藻种。 结果: 1.培养分离出7种沙漠微藻,对其基因组18SrDNA进行序列扩增及分析,结果显示有2种隶属于小球藻属,1种隶属于胶球藻属,1种隶属于链带藻属,1种隶属于Chlorosarcinopsis属,1种隶属于片球藻属,还有1种未明确到属,可能为新的物种。 2.对分离藻种中的2种进行了5.8SrDNA-ITS序列扩增及分析,其中GTD8A1与Chlorella sp.MBIC10595可能为同一物种,GTD9C2可能为Desmodes musmultivariabilis种内的一个变种。 3.微藻样品中的粗脂含量最高为片球藻属,含量达26.4%(占细胞干重),最低为小球藻属,含量为7.8%(占细胞干重),2种小球藻的粗脂含量都偏低,片球藻属在生物量和粗脂含量上都有明显优势,是制备生物柴油比较优良的藻种来源。 4.微藻油脂制备生物柴油的主要脂肪酸甲酯组分为C16:0、C17:0和C18不饱和脂肪酸甲酯,C12:0、C14:0、C18:0和C20:0含量都比较少,C18:3含量最高,其中有4株微藻样品的C18:3含量均超过40%(占脂肪酸甲酯总含量)。 结论: 1.运用96孔板有限稀释法培养分离出7种沙漠微藻,通过18SrDNA序列分析将其初步鉴定到属,分别来自胶球藻属、小球藻属、链带藻属、Chlorosarcinopsis属、片球藻属,并通过5.8SrDNA-ITS序列分析将分离藻种中的2个物种鉴定到种。 2.筛选出一株生物量及粗脂含量都比较高的沙漠微藻,其生物量为0.276g/L,粗脂含量占细胞干重的26.4%,是制备生物柴油比较优良的藻种来源。 3.微藻油脂制备生物柴油的脂肪酸甲酯组分含有丰富的C16—C18系脂肪酸甲酯,C16:0的普遍存在且有较高的含量对于制备的生物柴油十六烷值的提高有很大益处,长链脂肪酸甲酯也是柴油替代品的理想物质成分。