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目的：微小病变型肾病（MCNS）发病机制至今仍不明确。呼吸道病毒感染是MCNS主要的触发因素之一。乙酰肝素酶（Hpa）是目前发现的哺乳动物细胞中唯一能降解肾小球基底膜（GBM）硫酸乙酰肝素（HS）侧链的D-葡萄糖醛酸内切酶。Hpa表达增加或活性增强将使HS侧链分解变短，导致GBM电荷屏障破坏和蛋白尿的发生。本研究从触发MCNS最常见的呼吸道病毒——呼吸道合胞病毒（RSV）着手，以Hpa为切入点，从活体内、活体外两个方面探讨Hpa在RSV触发MCNS发病机制中的作用，为进一步阐明呼吸道病毒触发MCNS发病机理提供新思路。方法：1、以6x106PFU RSV接种SD大鼠，建立RSV致大鼠肾病变模型。接种RSV 4d、8d、14d、28d、56d和84d(RSV4、RSV8、RSV14、RSV28、RSV56和RSV84)后，在观察肾组织病理、尿蛋白定量、血生化指标、肾和肺组织RSV mRNA表达的基础上，采用PEI染色检测GBM阴离子位点，免疫组化和实时荧光定量RT-PCR检测肾组织Hpa表达，分析肾组织Hpa表达与尿蛋白和GBM阴离子位点之间的相关性。2、在接种RSV之前、同时和之后给大鼠腹腔注射肝素500IU／kg（即试验组A、试验组B、试验组C），以仅接种RSV（试验组D）和未接种RSV（正常对照组）为对照，14d后处死大鼠，观察肝素对RSV致大鼠肾病变模型肾组织Hpa表达、GBM阴离子位点、肾组织RSV mRNA表达以及尿蛋白的影响。3、原代培养及鉴定GEC。6×1O1PFU RSV体外感染大鼠肾小球上皮细胞（GEC）、大鼠系膜细胞株（HBZY-1细胞）和大鼠近端肾小管上皮细胞株（NRK52E细胞），采用MTT法检测HBZY-1和NRK52E细胞活性，原位杂交检测GEC、HBZY-1和NRK52E细胞RSV mRNA表达，以及透射电镜观察GEC、HBZY-1和NRK52E细胞的细胞病变和病毒颗粒；从而研究RSV对大鼠GEC、系膜细胞和肾小管上皮细胞的致细胞病变效应（CPE）。4、在RSV体外感染大鼠GEC、HBZY-1和NRK52E细胞基础上，采用免疫组化分析大鼠GEC、HBZY-1和NRK52E细胞Hpa表达变化，实时荧光定量RT-PCR及Western blot观察HBZY-1和NRK52E细胞Hpa mRNA和蛋白质表达，从而分析RSV感染大鼠肾脏细胞后Hpa表达的动态变化；免疫荧光显示HBZY-1和NRK52E细胞磷酸化ERK、磷酸化p38MAPK和NF-κBp65核易位；ERK、p38 MAPK信号传导通路抑制剂PD98059和SB203850预处理HBZY-1和NRK52E细胞30分钟后，给予RSV刺激，然后采用Western blot检测HBZY-1和NRK52E细胞Hpa蛋白质表达，从而初步阐明ERK和p38MAPK信号通路在肾脏细胞Hpa基因表达调控中的作用。结果：1、成功复制RSV致大鼠肾病变模型。RSV可致大鼠尿蛋白增加，RSV14＞RSV28＞RSV8＞RSV4＞RSV56＞RSV84，RSV84组与正常对照组之间无显著性差异。与正常对照组相比，RSV4、RSV8、RSV14与RSV28组肾小球Hpa蛋白质表达增加，RSV4、RSV8、RSV14肾组织Hpa mRNA表达增加；RSV4、RSV8、RSV14和RSV28组肾小球Hpa蛋白质表达与24h尿蛋白定量之间呈正相关关系：RSV4、RSV8、RSV14和RSV28组GBM阴离子位点减少，尤其是RSV14组；24h尿蛋白定量与GBM阴离子位点之间呈负相关。2、在接种RSV之前、同时和之后给予肝素干预，大鼠24h尿蛋白定量明显降低，GBM上PEI染色颗粒增多；肾脏RSV mRNA阳性表达信号明显减弱；肾小球内有微量Hpa蛋白质表达，Hpa mRNA表达减少。3、RSV体外感染大鼠GEC、HBZY-1和NRK52E细胞后，细胞浆和细胞核内出现不同程度病变，同时可见细胞内有RSV mRNA阳性表达和病毒样颗粒。RSV感染HBZY-1和NRK52E细胞后，可导致细胞活性降低。4、RSV刺激大鼠肾脏细胞后，呈时间依赖性诱导Hpa mRNA和蛋白质表达，以48h组表达水平最高：RSV感染大鼠HBZY-1和NRK52E细胞12h后，磷酸化ERK、磷酸化p38MAPK和NF-κB p65在细胞核和细胞浆内同时表达，而无RSV感染的HBZY-1和NRK52E细胞只有细胞浆内表达；在感染RSV前30分钟，给予PD98059和SB203850预处理，HBZY-1和NRK52E细胞中磷酸化ERK、磷酸化p38MAPK和NF-κB p65细胞核内表达受到抑制，同时Hpa蛋白质表达呈剂量依赖性降低。结论：GEC、系膜细胞和肾小管上皮细胞等肾脏细胞对RSV普遍易感，RSV可能通过正、负电荷吸引机制与肾脏细胞表面上带负电荷的HS侧链结合，进入肾脏细胞内生长、繁殖；然后，通过活化ERK和p38MAPK信号通路，激活转录因子NF-κB，从而增加肾小球内Hpa表达，分解GBM上HS侧链，导致GBM电荷屏障破坏和蛋白尿发生。由此可见，Hpa在RSV触发MCNS发病机制中可能发挥非常重要的作用，早期使用肝素可抑制RSV进入肾细胞，降低肾小球内Hpa表达，抑制Hpa活性，从而保护GBM电荷屏障，减少蛋白尿。