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1 胸膜肺炎放线杆菌三种PCR检测方法的评估 血清学诊断方法是常用的App检测手段，但该法应用受到许多方面的限制。近15年来，App PCR检测方法已有许多报道，本实验通过特异性实验、敏感性实验、样品的直接检测等方面，对从已报道的PCR方法中筛选出的3种即apx-PCR、omlA-PCR、cpx-PCP进行了比较，并确定cpx-PCR作为较适合本实验室的最佳检测方法。 2 胸膜肺炎放线杆菌PCR快速分型系统的建立及初步临床应用 根据外膜蛋白基因中间部分的差异，毒素基因和荚膜基因的型特异性，建立3个多重PCR的分型体系，可将Appl～12型分成11个模式，除9型和11型外完全区分。此分型体系用于临床分离株JS3，ZJ5和JS7的分型，得出的结果和血清学分型一致。对人工发病猪扁桃体和肺脏各12份，鼻拭子8份，-20℃保存一年的人工发病猪扁桃体和肺脏各3份分型结果与已知血清型一致。从20份临床可疑病料中检测出2份阳性，均为7型。从健康猪扁桃体250份中检测出3份阳性，一份为4型，一份为12型，一份为3型。 3 猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ和Ⅲ基因的串连表达及序列分析 参照GenBank中的App血清8型和10型菌株序列分别设计了一对特异性引物，用PcR方法扩增毒素Ⅰ（ApxⅠ）基因5’端部分基因，得到1047bp的片段，毒素Ⅲ(ApxⅢ基因3’端部分基因，得到868bp的片段，然后重叠延伸剪切术（SOE）将两段PCR产物连接，将连接产物（apxⅠ-apxⅢ）克隆到pMD18-T载体中，经测序比较，与GenBank中公布的序列核苷酸同源性分别达99.3％（毒素Ⅰ）和98.5％（毒素Ⅲ），从T-载体中切下目的片段后，定向克隆到pET32a（+）中，转化BL21（DE3），经诱导后，进行SDS-PAGE实验，目的基因获得表达，免疫转印鉴定呈阳性。apxⅠ-apxⅢ串联基因片段体外成功表达。