论文部分内容阅读
目的:肺癌是当今发病率较高的癌症,表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)的应用为患者带来了福音,但临床应用一段时间后患者均会出现获得性耐药。ROR1蛋白作为一种跨膜受体酪氨酸激酶蛋白,在肺腺癌、乳腺癌、卵巢癌等多种癌症中都有异常高表达,且与癌细胞的生长、增殖、迁移、侵袭等过程相关。本研究的主要目的是探讨沉默肺腺癌细胞株中ROR1蛋白的表达,能否增强厄洛替尼的治疗效果以及可能的机制,以期解决耐药问题。方法:将一厄洛替尼敏感细胞株PC-9,暴露在含有一定浓度厄洛替尼的培养基中,建立获得性对厄洛替尼耐药的细胞株——PC-9erlo;将原始耐药细胞株(XLA-07、NCI-H1975)和获得性耐药细胞株(PC-9erlo)中的ROR1蛋白用si RNA沉默,流式细胞术检测此蛋白表达是否被有效沉默及蛋白表达量降低程度;NCI-H1975和PC-9erlo细胞株通过细胞毒性实验检测沉默ROR1后联合不同浓度厄洛替尼,对细胞生长的抑制作用与单独使用厄洛替尼比较是否有所加强;流式细胞术检测NCI-H1975、PC-9erlo和XLA-07三种细胞株,沉默ROR1联合特定浓度的厄洛替尼造成的细胞凋亡,与单独使用厄洛替尼相较是否有所增加;用蛋白印迹法和悬浮芯片检测NCI-H1975细胞株不同处理组细胞中AKT/m TOR信号通路各相关分子表达量变化情况。结果:1.PC-9母系细胞株在含有一定浓度厄洛替尼的培养基中培养8个月后对厄洛替尼获得性耐药,IC50值相应升高,其对厄洛替尼敏感性降低。2.使用针对ROR1蛋白的si RNA作用于细胞,可以抑制ROR1在各肺腺癌细胞株中的表达,其平均抑制率均大于75%。3.NCI-H1975、PC-9erlo细胞株用针对ROR1蛋白的si RNA作用后,厄洛替尼对肺腺癌细胞株的抑制作用增强。4.NCI-H1975、PC-9erlo、XLA-07三种细胞株沉默ROR1联合厄洛替尼组细胞的凋亡率较单独使用厄洛替尼组均有提高。5.NCI-H1975细胞株中药物联合组细胞提取的蛋白中AKT/m TOR信号通路中的各关键分子磷酸化水平降低,与细胞存活呈正相关的Bcl-2分子表达量亦显著下降,且具有统计学差异(p<0.01,p<0.001)。结论:沉默ROR1可改善厄洛替尼的耐药现象,并且其机制可能与AKT/m TOR信号通路密切相关。