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目的:利用人、小鼠卵巢癌细胞株、卵巢癌病理标本和IL-17A敲除(Knock Out,KO,IL-17A-/-)小鼠系统地探讨外源性和内源性IL-17A(Interleukin-17A)对卵巢癌(ovarian cancer,OVCA)脂质代谢及腹腔网膜转移的影响及其作用机制,旨在为控制卵巢癌的网膜转移提供新的靶点和思路。方法:1.利用Western blotting技术检测不同浓度rh IL-17A处理不同时间对OVCAR3和A2780细胞脂肪酸代谢相关分子(FABP4,CD36,ATGL,MAGL,HSL,CPT1C)和细胞相关信号分子NF-КB和STAT3表达水平及其磷酸化水平表达的影响。同时应用Western Blotting技术检测NF-КB抑制剂PDTC和STAT3抑制剂STATTIC分别处理OVCAR3和A2780细胞2h后,rh IL-17A对OVCAR3和A2780细胞中脂肪酸结合蛋白FABP4和细胞相关信号分子NF-КB和STAT3表达水平及其磷酸化水平表达的影响。2.利用MTS细胞增殖实验检测rh IL-17A和/或脂肪酸(如棕榈酸PA)对OVCAR3和A2780细胞增殖的影响。并分别以STAT3抑制剂STATTIC、NF-КB抑制剂PDTC和FABP4抑制剂BMS309403进行相应的封闭实验。3.利用脂肪酸转运实验结合油红O染色定性和定量实验检测rh IL-17A和/或PA对OVCAR3和A2780细胞脂肪酸转运的影响。并分别以STAT3抑制剂STATTIC、NF-КB抑制剂PDTC以及FABP4抑制剂BMS309403进行相应的封闭实验。4.收集不同FIGO分期的上皮性卵巢癌OVCA(epithelial OVCA,EOC)临床病理标本,采用免疫组化法检测IL-17A和脂肪酸结合蛋白FABP4的表达,并分析IL-17A与FABP4及其与卵巢癌患者临床分期、转移和预后的相关性。5.利用C57BL/6野生型(wild type,WT)、IL-17A敲除小鼠和ID8细胞建立小鼠卵巢腹腔种植瘤动物模型,观察内源性IL-17A对小鼠卵巢腹腔内成瘤和转移的影响,并应用免疫组化法分析肿瘤组织中IL-17A和FABP4蛋白表达水平,应用Western Blotting技术分析内源性IL-17A对肿瘤组织中FABP4和细胞相关信号分子STAT3表达水平及其磷酸化水平的影响。6.酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测卵巢癌网膜富脂转移微环境(adipocyte-rich metastatic niche)中IL-17A的主要细胞来源。结果:1.Western blotting实验结果显示,rh IL-17A(10ng/ml,处理24h)可显著增加OVCAR3和A2780细胞中脂肪酸结合蛋白FABP4的表达水平和细胞相关信号分子NF-КB和STAT3的磷酸化水平(P<0.05),然而对CD36,ATGL,MAGL,HSL和CPT1C蛋白表达无显著影响(P>0.05);加入NF-КB抑制剂PDTC后,rh IL-17A对OVCAR3和A2780细胞中p-NF-КB蛋白表达的促进作用显著降低(P<0.01),而对FABP4蛋白表达的促进作用无显著影响(P>0.05);加入STAT3抑制剂STATTIC后,rh IL-17A对OVCAR3和A2780细胞中p-STAT3蛋白表达和FABP4蛋白表达的促进作用显著降低(P<0.05)。2.MTS实验结果显示,单独rh IL-17A和单独PA作用均对OVCAR3和A2780细胞的增殖无显著影响(P>0.05);同时加入rh IL-17A(10ng/ml)和PA(25μM)可显著促进OVCAR3和A2780细胞的增殖(P=0.006);STAT3抑制剂STATTIC和FABP4抑制剂BMS309403可抑制此促进作用(P<0.05),NF-КB抑制剂PDTC对该促进效应没有显著影响(P>0.05)。3.脂肪酸转运实验结合油红O染色定性和定量实验的结果显示,单独加入rh IL-17A和PA对OVCAR3和A2780细胞的脂肪酸转运无显著影响(P>0.05),同时加入rh IL-17A(10ng/ml)和PA(25μM)可显著促进OVCAR3和A2780细胞的脂肪酸转运(P<0.05)。STAT3抑制剂STATTIC和FABP4抑制剂BMS309403均可显著抑制rh IL-17A对OVCAR3和A2780细胞脂肪酸转运的促进作用(P<0.05),然而NF-КB抑制剂PDTC对该促进效应无显著影响(P>0.05)。4.卵巢癌临床病理组织标本分析表明,IL-17A和FABP4的表达与临床患者的卵巢癌临床分期(FIGO分期)、淋巴结转移和腹水转移等呈正相关(P<0.01);IL-17A的表达强弱与FABP4的蛋白表达水平呈正相关(P<0.01)。5.小鼠体内实验显示,内源性IL-17A可显著促进小鼠卵巢腹腔内成瘤(P=0.021)以及肿瘤组织中脂肪酸结合蛋白FABP4的表达水平(P=0.001)和细胞相关信号分子STAT3的磷酸化水平(P<0.01)。WT小鼠卵巢癌组织中FABP4表达呈强阳性,IL-17-/-小鼠卵巢癌组织中FABP4表达均呈弱阳性,与WT小鼠组相比具有显著性差异(P=0.018)。6.ELISA结果显示,卵巢癌网膜富脂转移微环境中巨噬细胞和脂肪细胞均可分泌IL-17A。结论:本研究通过人卵巢癌细胞株体外实验、卵巢癌病理标本分析和动物体内实验进行研究,结果表明IL-17A可通过激活STAT3信号通路上调FABP4的表达,进而促进微环境中游离脂肪酸的摄取,为卵巢癌细胞的生长与增殖提供能量,从而促进卵巢癌网膜转移灶的生长。该研究提示IL-17A和FABP4可能成为改善卵巢癌转移的新靶点。