中药总黄酮成分及其复方的体外抗病毒作用观察

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通过体外试验的方法初步筛选出抗新城疫病毒效果较好的中药总黄酮成分,在此基础上进一步将所筛选的单味总黄酮成分进行组方,研究总黄酮复方抗新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞的作用,以筛选出抗新城疫病毒效果较好的复方,为临床应用及新药开发奠定理论基础,本研究具体分以下几个部分:试验Ⅰ中药总黄酮成分提取及其在鸡胚成纤维细胞上最大安全浓度的测定采用乙醇液回流结合酸碱沉淀法分别提取了三七、黄芩、粉葛根、半枝莲、忍冬藤、菟丝子、骨碎补、野菊花、一枝黄花等9种中药中的总黄酮。然后采用MTT法测定了10种中药总黄酮成分(淫羊藿总黄酮为实验室保存)在鸡胚成纤维细胞中的安全浓度。结果表明:在所提取的9种中药总黄酮中,黄芩总黄酮的提取率最高,分别达到8.40%;忍冬藤总黄酮的提取率为最低。三七总黄酮在CEF上的最大安全浓度为31.3μg·mL-1,黄芩总黄酮、粉葛根总黄酮、半枝莲总黄酮、菟丝子总黄酮、野菊花总黄酮、一枝黄花总黄酮、淫羊藿总黄酮成分最大安全浓度为62.5μg·mL-1,忍冬藤总黄酮和骨碎补总黄酮成分在浓度为125μg.mL-1时对体外培养的鸡胚成纤维细胞是安全的,且各中药总黄酮成分在安全浓度范围内均有一定的促进细胞增殖或延长细胞存活时间的作用。试验Ⅱ十种中药总黄酮成分对NDV感染CEF的影响为筛选出抗病毒效果较好的总黄酮成分,本试验将10种中药总黄酮成分从CEF安全浓度起各倍比稀释成5个浓度,以先加中药后接种病毒、先接种病毒后加中药和药物与病毒同时加入(既病毒和药物同时)3种加药方式加入到CEF单层中,以MTT法测定了各中药总黄酮成分对NDV感染CEF的影响。结果表明:各总黄酮成分均表现出不同程度的抗病毒活性。其中淫羊藿总黄酮在先加药物、先加病毒2种方式中浓度为31.3-15.6μg·mL-1、病毒和药物同时加入且浓度为31.3μg·mL-1时,黄芩总黄酮在先加病毒方式中浓度为7.8-3.9μg·mL-1时,野菊花总黄酮在先加药物方式中浓度为62.5-31.3μg·mL-1和病毒和药物同时加入方式中浓度为3.9μg·mL-1时,其As70值均显著大于病毒对照与细胞对照,表明这些药物总黄酮成分具有较好的体外抗病毒效果。综合考虑3种加药方式及黄酮提取率等因素,初步筛选出淫羊藿总黄酮、黄芩总黄酮、野菊花总黄酮、三七总黄酮4种中药总黄酮作为抗病毒中药黄酮成分复方的主要组方药物。试验Ⅲ中药总黄酮成分复方对NDV感染CEF的影响为筛选出体外抗病毒效果较好的中药总黄酮成分复方,本试验以上一章筛选出的抗病毒效果较好的淫羊藿总黄酮、黄芩总黄酮、野菊花总黄酮、三七总黄酮4个单味总黄酮成分进行组方,得到9个中药总黄酮成分复方,分别从安全浓度起倍比稀释5个浓度后,以3种加药方式加入到CEF单层细胞中,通过MTT法观察了9个总黄酮成分复方对NDV感染CEF单层细胞的影响。结果显示,各复方在3种加药方式中均表现一定的抗病毒活性,以A570值和最高病毒抑制率进行综合评价,发现淫黄、淫野黄、淫三野黄3个复方的抗病毒效果最好,其次为淫野三。
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