研究目的分子印迹技术(MIT)是在聚合物基质中形成具有模板记忆的选择性位点。近年来,分子印迹聚合物(MIPs)因其所需的选择性,物理稳定性,热稳定性以及低成本等特性而引起了广泛的关注,并被广泛应用于固相萃取,化学传感器和人工抗体等许多领域。随着其作为研究热点的快速发展,它同时面临着许多挑战,涉及生物大分子印迹困难,结合位点异构,模板渗漏,与水介质的不相容性,结合能力低和传质缓慢,特别是现有分子印迹技术普遍存在的步骤繁琐等问题限制了其在多个方面的应用,效率低下等问题。针对于此种问题,我们构建了一种全新的高效分子印迹制备策略称为:反相微乳液定向表面印迹(Reversed Phase Microemulsion Oriented Surface Imprinting,RPM-OSI),这种方法将反相微乳液合成硅包磁纳米粒子与定向表面印迹综合起来,同时拥有这两种方法的优势,不仅如此,该种印迹策略可以扩展至其他的印迹体系中。显示了此种印记方法的通用性,此方法的出现为快速高效制备分子印迹材料提供了一条新思路。研究方案首先,我们选择适合的功能单体分别以RMP-OSI法与Bulk Imprinted合成以单磷酸腺苷(AMP)为印迹模板的MIPs,我们利用AMP印迹聚合物吸附AMP溶液,之后选择合适的洗脱液洗脱后测其吸光度,对合成的AMP印迹的SENMPs(Silica-Encapsulated Nanomagnetic Particles)进行一系列表征,并优化了此种新的合成方法。之后把它与Bulk imprinted的AMP印迹SENMPs做一系列对比,包括交叉反应性(选择七种与模板分子结构相似的化合物)等一系列参数,以体现该印迹方法的优越性。其次,由于磷酸化蛋白在生物体内具有重大的生物学意义,但其丰度太低,在检测之前富集是目前通行的做法,分子印迹技术是目前发展出来的一种新型富集方法,也是目前的研究热点,瞄准磷酸化蛋白检测这一热点,我们以RMP-OSI法,以磷酸根为模板,合成相应的印迹材料,并对这种方法进行相应的优化。对磷酸化肽进行特异性富集,并与基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)联用,建立离线联用平台用于蛋白质磷酸化的高效鉴定。最后,在真核生物中,蛋白质磷酸化的残基是丝氨酸(Ser),苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr),并且Ser,Thr和Tyr残基上的磷酸化比率是1800:200:11。然而含有p Tyr肽的蛋白质丰度非常低,且在质谱检测中磷酸肽的信号通常被高通量非磷酸化肽抑制。因此,有在MS分析之前要选择性富集p Tyr肽是必须的。我们针对于这个研究热点,为了进一步拓展RMP-OSI印迹方法的应用范围,我们以苯基膦酸(PPA)为模板,合成相应的印迹二氧化硅包裹的纳米磁性颗粒SENMPs。并以其特异性富集酪氨酸磷酸化肽段,用于MALDI-TOF MS检测。研究结果我们优化了以RMP-OSI印迹方法,印迹效果主要以印迹因子(IF)值体现,我们经过一系列实验发现,最好的印迹条件为三种硅烷化试剂加入比例为TEOS:APBA-GPTES:APTES为9.8:0.2:0.2,模板分子的加入量与APTES的摩尔比为1:1。之后我们把这种新方法与传统的Bulk imprint相比,前者得到的印迹材料交叉反应性远远低于传统的印迹方法,证明了其具有良好的抗干扰性与选择性,且其为“一锅法”优势在于其极大的简化了实验步骤。之后我们以同样的方法略作修改(改变其功能单体)合成磷酸根印记的SENMPs,同样将其合成过程优化,最佳硅烷化试剂加入比例为TEOS:UPTES=9.8:0.2,模板剂磷酸根的加入量与与修饰功能单体的硅源UPTES摩尔比为1:1。之后用PO4印迹SENMPs吸附吸附胰酶消化后的β-酪蛋白,发现其对磷酸化肽段的吸附性能优异。最后我们进一步拓展了此印迹方法应用范围,以苯基膦酸为印迹模板合成PPA印迹SENMPs,并以其富集酪氨酸磷酸化肽,由于在合成过程中仅替换了模板,其他如功能单体、硅烷化试剂都与PO4-印迹聚合物的合成过程相同,故直接采用磷酸根印迹优化后最佳结果。