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目的:探索HSYA对Balb/c肝癌小鼠抗癌作用及免疫器官的影响,探索HSYA对调节性T细胞的影响和对Balb/c肝癌小鼠肿瘤免疫微环境中相关因子的影响。方法:实验一:建立Balb/c原位肝癌小鼠模型,观察不同剂量HSYA对Balb/c肝癌小鼠一般生长状况、体重的影响,计算小鼠胸腺与脾脏指数以观察HSYA对Balb/c肝癌小鼠免疫器官的影响,HE染色观察HSYA对肝癌小鼠的抗瘤作用。实验二:免疫荧光标记法检测肝癌小鼠脾脏中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的比例,研究HSYA对肝癌小鼠整体免疫系统中调节性T细胞的影响;运用real-time PCR和免疫组化法检测肿瘤组织中FOXP3的mRNA和蛋白的表达,研究HSYA对肝癌小鼠局部肿瘤组织中调节性T细胞的影响。实验三:采用CBA法检测血清中Th1、Th2型细胞因子水平,real-time PCR法检测肿瘤组织中TLR4、TGF-β1、RORyt的mRNA表达水平,探究HSYA对肿瘤免疫微环境中相关细胞因子的影响。结果:实验一:对照组、模型组、HSYA各剂量组小鼠体重有上升的趋势,而顺铂和联合用药组小鼠体重反而下降,且从干预第7天起差异呈显著性(P<0.05);与模型组比,HSYA各剂量组无显著性差异;与顺铂组比,联合用药组小鼠体重上升,在干预第4、5、6天时差异呈显著性(P<0.05)。与对照组比,模型组中胸腺指数与脾脏指数有减小的趋势,但无统计学差异(P>0.05),顺铂组和联合用药组小鼠胸腺指数和脾脏指数明显减小,差异呈极显著性(P<0.01);与模型组比,HSYA各剂量均可增加小鼠胸腺指数,且有统计学差异(P<0.05),其中HSYA中剂量和低剂量呈极显著差异(P<0.01),HSYA各剂量对脾脏指数变化不明显(P>0.05),而顺铂组与联合用药组小鼠胸腺指数和脾脏指数明显减小,且差异呈极显著性(P<0.01);与顺铂组比,联合用药组有增加胸腺指数和脾脏指数的趋势,但无显著差异(P>0.05)。病理结果显示,肝癌小鼠对照组中肝组织的肝小叶结构清晰,细胞排列整齐,呈条索状。模型组中,可见癌组织呈实性片状,癌细胞大小不一,间隙不一,排列不规则。HSYA中、低剂量组和顺铂组小鼠肝组织见散在的片状癌细胞聚集,片状面积和数量明显较模型组减少,呈现癌前病理变化。与顺铂组比,联合用药组小鼠肝组织几乎未见实性片状癌组织,只见散在的肝癌细胞。实验二:与对照组比,模型组肝癌小鼠脾脏中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比例、肝癌组织中Foxp3 mRNA和蛋白含量均显著性增加(P<0.05);与模型组比,HSYA中剂量能显著降低小鼠脾脏中Treg的比例、显著降低癌组织中Foxp3 mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05);与顺铂组比,HSYA与顺铂联用对肝癌小鼠脾脏中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比例和癌组织中Foxp3 mRNA影响不大(P>0.05),但能显著降低癌组织中Foxp3蛋白的含量(P<0.05)。实验三:与对照组比,肝癌小鼠血清中TH1型(IL-2、IFN-γ、TNF)和TH2型(IL-4、IL-5)均无显著性差异(P>0.05);与模型组比,HSYA各剂量组对肝癌小鼠血清中Th1、Th2细胞因子未见明显的改善作用,无统计学差异(P>0.05)。与对照组比,模型组小鼠癌组织中TLR4和RORytmRNA表达显著增加(P<0.01),癌组织中TGF-β1 mRNA的表达无统计学差异(P>0.05);与模型组比,HSYA中剂量组能减少肝癌小鼠癌组织中TLR4和RORytmRNA表达,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:1、一定浓度的HSYA对Balb/c原位肝癌小鼠有抗癌的作用,且能增强小鼠的免疫力。此外,HSYA与顺铂联用有较好的抗癌作用,尤其能改善因顺铂化疗所致的免疫功能低下的状况。2、HSYA能通过减少脾细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比例,降低肿瘤组织中Foxp3 mRNA和蛋白的表达,从而改善肿瘤免疫微环境,进而起到一定的抑瘤的作用。3、一定浓度的HSYA能减少肿瘤免疫微环境中TLR4、RORγt的mRNA表达,但对Th1型、Th2型细胞因子和TGF-β1 mRNA表达水平影响不大。