论文部分内容阅读
目的:探讨人参皂甙Rg3对人乳腺癌细胞株MCF-7表面LeY寡糖抗原及其合成关键酶(FUT1/4)的作用,探讨人参皂甙Rg3抑制肿瘤细胞生长、转移潜能的机制,为临床肿瘤辅助治疗中应用人参皂甙Rg3提供理论依据。方法:体外培养人乳腺癌细胞株MCF-7,采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测人参皂甙Rg3对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖活力的影响;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测人参皂甙Rg3作用后FUT1、FUT4表达情况;细胞免疫荧光检测人参皂甙Rg3作用后LeY寡糖抗原变化情况。结果:1.不同浓度的人参皂甙Rg3作用24h、48h后,对MCF-7细胞增殖的抑制作用:人参皂甙Rg3在浓度为12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml分别作用于人乳腺癌细胞株MCF-7。24h后抑制率分别为13.36%、26.41%、35.46%、44.19%、48.92%、53.65%。Rg3处理组与空白对照组比较,浓度为50μg/ml以上均明显抑制肿瘤细胞增殖(P<0.05);48h后抑制率分别为25.06%、37.84%、48.40%、54.79%、70.76%、75.68%,25μg/ml以上均有统计学意义(P<0.05)。作用时间上比较,24h和48h人参皂甙Rg3对肿瘤细胞的抑制率无统计学差异(P=0.051)。形态学分析,在倒置显微镜下可见,经药物作用后MCF-7细胞数目减少,细胞形态由原来的贴壁良好、饱满、多角形、梭形变为类圆形、悬浮、颜色变暗、无折光性,且随药物浓度的增加细胞形态变化越大。2.RT-PCR检测Rg3对基因FUT1、FUT4的表达水平:各实验组和空白对照组分别作用MCF-7细胞24h后,提取各组细胞mRNA,然后进行PCR反应。在凝胶成像系统下观察:对照组和药物组均有FUT1、FUT4基因、内参基因β-action的表达。经Lab-work软件分析对照组FUT1、FUT4表达较药物组强,在药物组随浓度增加(12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)FUT1、FUT4表达减弱。对照组与药物组浓度为12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml相比,无统计学差异(P>0.05);与浓度100μg/ml相比有显著的统计学差异(P=0.01)。药物组各个浓度之间比较:浓度100μg/ml分别与浓度12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml相比,均有统计学差异(P<0.05),但是12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml这三个浓度组相比无显著差异(P>0.05)。3.细胞免疫荧光检测LeY表达情况显示:对照组荧光最强,且随药物浓度的增加荧光强度逐渐减弱。药物浓度为100μg/ml组荧光强度最弱。结论:1.人参皂甙Rg3对MCF-7肿瘤细胞增殖有一定的抑制作用,并且随药物浓度的增加,对肿瘤细胞的增殖抑制能力增强。2.合成LeY的关键酶基因FUT1、FUT4随人参皂甙Rg3的作用,表达逐渐减弱,并呈剂量依赖性,有显著的统计学差异。3.MCF-7肿瘤细胞经人参皂甙Rg3作用后,免疫荧光检测显示LeY随药物浓度增加,表达下降。有统计学差异。4.人参皂甙Rg3具有抑制岩藻糖基转移酶(FUT1和FUT4),降低LeY在MCF-7细胞的合成,抑制肿瘤细胞的生长,提示Rg3抗肿瘤作用机制之一。