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第一部分β-防御素在分泌性中耳炎大鼠咽鼓管鼓室的表达目的检测rBD-1、rBD-2 mRNA在分泌性中耳炎大鼠咽鼓管鼓室粘膜中的表达,初步探讨β-防御素在分泌性中耳炎发病机制中的作用。方法排除中耳感染的清洁级SD大鼠48只,随机分为4组,每组12只。前3组36只行颈部切口经右侧听泡注入脂多糖溶液(lmg/ml)30μL,造模后分别于1、3、7天断头取咽鼓管鼓室粘膜；对照组12只大鼠右侧听泡注入生理盐水30μL,左侧听泡作为空白对照组,与造模3天组同时取咽鼓管鼓室粘膜。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测咽鼓管鼓室粘膜rBD-1、rBD-2在mRNA水平的表达,Image J软件分析电泳图并进行半定量。结果正常SD大鼠咽鼓管鼓室粘膜存在rBD-1、rBD-2 mRNA的表达,rBD-1 mRNA的相对表达量较rBD-2 mRNA强(P<0.01)。造模后1、3、7天,rBD-1 mRNA表达变化不明显,rBD-2 mRNA表达在造模后1、3天增加明显(P<0.01),第7天渐回复到正常水平。结论在SD大鼠,rBD-1可能参与正常咽鼓管鼓室的防御功能,造模后rBD-2的表达增加可能与病原体入侵后的清除相关。第二部分TLR-2、TLR-4在分泌性中耳炎小鼠咽鼓管鼓室的表达目的用PAF诱导BALB/c小鼠分泌性中耳炎模型,检测造模前后TLR-2、TLR-4在咽鼓管鼓室粘膜的表达,探讨PAF、TLR与分泌性中耳炎发病之间的关系。方法SPF级BALB/c小鼠50只,排除中耳感染,随机分为5组,每组10只。前4组经双侧鼓膜注入PAF 5μL(1μg)制作分泌性中耳炎小鼠模型,造模组8只小鼠分别于1、3、7、10天断头取咽鼓管鼓室粘膜；对照组8只小鼠右侧听泡注入生理盐水5μL,左侧听泡作为正常对照组,与造模7天组同时取咽鼓管鼓室粘膜。每组另2只小鼠取听泡固定并脱钙后制作冰冻切片,行HE染色观察造模后组织学变化。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),蛋白质印迹(western-blot)检测小鼠咽鼓管鼓室粘膜TLR-2、TLR-4的表达；免疫荧光(冰冻切片)确认TLR-2、TLR-4表达的具体部位。结果PAF 1μg经鼓膜注射诱导的BALB/c小鼠分泌性中耳炎,炎症可持续10天。正常BALB/c小鼠咽鼓管鼓室粘膜存在TLR-2、TLR-4 mRNA的表达,两者相对表达量比较差异不显著；PAF诱导后两者表达均增强,造模前后的表达差异有显著性(P<0.01);western-blot证实炎症粘膜中TLR-2、TLR-4在蛋白水平的表达高于正常粘膜(P<0.01)；免疫荧光显示TLR-2、TLR-4广泛表达于鼓室粘膜,在炎症鼓室粘膜中表达有增强(P<0.01),咽鼓管粘膜中主要为TLR-2绿色荧光,鼓膜及中耳腔炎症细胞表面主要为TLR-4红色荧光。结论PAF在中耳粘膜诱导TLR-2、TLR-4表达上调,PAF诱导的分泌性中耳炎小鼠模型可用以进一步研究PAF、TLR在分泌性中耳炎发病中的具体作用及相互联系。