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第一部分新型底涂-冲洗剂对自酸蚀粘接剂的短期和长期牙本质粘接强度的影响目的：研究含有酸性功能单体MDP和基质金属蛋白酶(MMPs)抑制剂(苯扎氯铵(BAC)、聚乙烯磷酸(PVPA)、原花青素(PA))的新型底涂-冲洗剂处理牙本质后,对自酸蚀粘接剂的短期和长期牙本质粘接强度和树脂-牙本质界面微观形态的影响。材料和方法：用MDP和MMPs抑制剂配制8种底涂-冲洗剂(5%MDP, 5%MDP-BAC,5%MDP-PVPA,5%MDP-PA,15%MDP,15%MDP-BAC,15%MDP-PVPA,15%MDP-PA(wt);其中BAC,PVPA和PA分别为1%wt,1000μg/ml和15%PA)。将54颗离体牙随机分为9组,每组6颗牙齿。用IsometTM低速切割机将离体牙垂直于牙冠长轴冠牙合中1/3处切开,暴露牙本质表面后用320#SiC打磨制备统一的玷污层。将实验组底涂-冲洗剂(5%MDP,5%MDP-BAC,5% MDP-PVPA,5%MDP-PA; 15%MDP,15%MDP-BAC,15%MDP-PVPA,15% MDP-PA)涂布于牙本质表面30s,水冲洗30s,气枪轻吹,而对照组不用底涂-冲洗剂处理。再用自酸蚀粘接剂Clearfil S3 Bond(可乐丽公司,日本)涂于牙本质表面20s,强吹5s,光固化(Radii plus,澳大利亚南方牙科工业有限公司)10 s,用复合树脂Clearfil Majesty(可乐丽公司,日本)分4层充填,每层厚度1mm,每次光固化40s。将样本置于37℃水储存24小时后,用低速切割仪把样本制成约1*1*8mm牙本质树脂条。来自同一颗牙齿的牙本质树脂条再随机分为即刻组(24h)和长期组(1y),水储存24h和1年后分别进行微拉伸强度(MTBS)测试实验。体视显微镜下观察所有断裂样本进行断裂模式分析。每组8个样本条用于扫描电镜观察树脂-牙本质界面的微观形态。将36颗离体牙随机分为9组,用低速切片机将牙冠切开,暴露冠中1/3牙本质,切取厚度0.7mm的牙本质片(每组2颗牙,6个牙本质片),样本制备同前,然后将样本制备超薄切片并透射电镜(TEM)观察。数据用SPSS 22.0软件处理,用析因设计方差分析和LSD多重比较进行统计学分析。结果：除5%MDP-BAC组外,低浓度MDP组(5%MDP,5%MDP-PVPA, 5%MDP-PA)均未能增加短期牙本质MTBS(P>0.05)。高浓度MDP组(15%MDP, 15%MDP-BAC,15%MDP-PVPA和15%MDP-PA)和5%MDP-BAC组的短期牙本质MTBS与对照组相比有显著性的提高(P<0.05)。实验组的长期牙本质MTBS均显著高于对照组(P<0.05)。其中15%MDP-BAC组的长期MTBS与15%MDP-PVPA组相比无明显差异(P>0.05),但前者显著高于其他组(P<0.05)。对照组经过1年水储存后MTBS显著降低(P<0.05)。而实验组MTBS未见明显改变(P>0.05)。SEM长期样本观察到对照组树脂-牙本质界面出现裂隙,而实验组复合树脂与牙本质结合紧密。底涂-冲洗牙本质表面后,牙本质表面玷污层大部分被去除。TEM长期样本观察到对照组玷污层内部出现微裂隙,实验组牙本质混合层与短期相比无明显改变,可见粘接剂层、少无结构层和混合层。在混合层中可见大量针状羟基磷灰石晶体。结论：应用新型底涂-冲洗剂5%MDP-BAC、15%MDP、15%MDP-BAC、 15%MDP-PVPA或15%MDP-PA可以显著增强自酸蚀粘接剂的牙本质短期和长期粘接强度,且使长期牙本质粘接强度至少一年不降低。底涂-冲洗方法(prime-&-rinse approach)是现在自酸蚀类粘接剂使用方法的一种全新补充。第二部分新型底涂-冲洗剂对基质金属蛋白酶的抑制作用目的：研究新型底涂-冲洗剂是否具有抑制MMPs的作用以及抑制强度。材料和方法：实验前,用10μg/ml胰蛋白酶与rhMMP-8或-9混合培养2小时以激活rhMMP-8和-9(Biolegend,圣地亚哥,美国),每组重复4次,用96孔板进行实验。每个实验混合溶液(100μl)孔中加入：2μ1 rhMMP-8或-9(19.6 ng/孔),10μl底涂-冲洗剂(5%MDP,5%MDP-BAC,5%MDP-PVPA,5%MDP-PA, 15%MDP,15%MDP-BAC,15%MDP-PVPA或15%MDP-PA),50μ1含硫多肽基质溶液(Sensolyte通用型MMP比色试剂盒提供,AnaSpec,菲蒙,美国)和38μl缓冲液。对照组包括：实验混合液对照组加一种10μl底涂-冲洗剂；阳性对照组加2μl rhMMP-8或-9;抑制剂对照组加2μl rhMMP-8或-9和10μl浓度为20μM的一种MMPs抑制剂GM6001(又称为加拉定,由Sensolyte比色试剂盒提供)；基质对照组加50 μl缓冲液。每个对照组加入适量缓冲液使体积达到50μl后,再加入50μl含硫多肽基质溶液使每个对照组总体积也达到100μl。每孔溶液混合后用酶标仪每隔10 min在412 nm处读数,共6次,得出吸光度均数后再计算,公式为：基质金属蛋白酶的抑制率=1一(实验混合溶液的吸光度—实验混合液对照组的吸光度)/(阳性对照组的吸光度—基质对照组的吸光度)。计算出的抑制率用单因素方差分析和Tukey多重比较,显著水平为0.05。结果：5%MDP底涂-冲洗剂对rhMMP-8,9的抑制率均显著低于其他7个底涂-冲洗剂组和对照组GM6001对rhMMP-8,9的抑制率(P<0.05)。其余7组底涂-冲洗剂对rhMMP-9的抑制率与对照组GM6001对rhMMP-9的抑制率相比无显著差异(P>0.05)。15%MDP-PVPA和15%MDP-PA底涂剂组对rhMMP-8的抑制率显著高于GM6001对rhMMP-8的抑制率(P<0.05)。结论：新型添加MMPs抑制剂的底涂-冲洗剂均具有显著抑制MMPs的作用。第三部分新型底涂-冲洗剂对自酸蚀粘接剂的牙本质粘接耐酶解性能的影响目的：研究新型底涂-冲洗剂(15%MDP,15%MDP-BAC,15%MDP-PVPA)对自酸蚀类粘接剂酶解前后的牙本质粘接强度和树脂-牙本质界面微观形态的影响。材料和方法：将108颗离体牙随机分为12组：3种粘接剂(AdperTM Easy One,3M ESPE,美国;i Bond,Heraeus Kulzer GmbH,德国;G-Bond,GC,日本),每种粘接剂36颗牙齿；每种粘接剂根据底涂剂不同分为1个对照组,3个实验组(15%MDP,15%MDP-BAC,15%MDP-PVPA),每个亚组9颗牙齿。用低速切割机暴露离体牙冠牙合中1/3的牙本质表面,然后用320#SiC打磨制备统一的玷污层。实验组将底涂剂分别涂布于牙本质表面30s,水冲洗10s,轻吹,而对照组不用底涂-冲洗剂处理牙本质表面,再按使用说明分别涂布自酸蚀粘接剂(AdperTM Easy One,i Bond,G-Bond),光固化,再分别用同一厂家复合树脂(FiltekTM250, Solitaire2,GC Gradia Direct)分层充填,每层厚度1mm,共4层,每次光固化40s。将所有样本置于37℃自来水中24小时后,用低速切割仪把样本切割成约1*1*8mm牙本质树脂条,来自同一颗牙齿的牙本质树脂条再随机分为三组：即刻组、I型和II型胶原酶处理组后,即刻组样本进行微拉伸强度测试,I型、II型胶原酶组的样本分别在2mg/ml I型和II型胶原酶(Sigma-Aldrich,美国)溶液储存24小时后进行MTBS测试,并计算微拉伸强度。将72颗离体牙随机分为12组(每种粘接剂24颗牙齿,每个亚组6颗牙齿),用IsometTM低速切割机垂直于牙冠长轴切开,暴露冠中1/3牙本质,切取厚度为0.7mm的牙本质片,样本制备同前,再用透射电镜观察树脂-牙本质界面的微观形貌。用SPSS22.0软件处理,析因设计方差分析和LSD多重比较进行统计学分析。结果：三种自酸蚀类粘接剂的即刻微拉伸强度按从大到小顺序排列如下：AdperTM Easy One>i Bond>G-Bond(P<0.01)。三个实验组(MDP,MDP-BAC, MDP-PVPA)的即刻MTBS均显著高于对照组(P<0.05),而在同一种粘接剂中的三个实验组之间并没有显著差异(P>0.05)。三种自酸蚀类粘接剂的对照组在经过I型胶原酶和II型胶原酶酶解后,MTBS均显著降低(P<0.05),实验组酶解后MTBS仍显著高于对照组(P<0.005)。三种底涂剂的耐酶解能力按从大到小顺序排列如下：MDP-BAC>MDP-PVPA>MDP.TEM观察发现对照组经过胶原酶酶解后,玷污层内部出现微裂隙,部分牙本质胶原基质松解游离,实验组酶解后的牙本质混合层相对完整,未见明显裂隙,混合层可见大量针状羟基磷灰石晶体。结论：用新型底涂-冲洗剂(MDP,MDP-BAC,MDP-PVPA)处理牙本质能够显著提高自酸蚀粘接的牙本质粘接强度和耐酶解能力,其中MDP-BAC组的耐酶解能力最强,为提高牙本质粘接的持久性提供实验依据。