RNAi干扰Survivin基因对促进卵巢癌细胞凋亡作用的体外研究

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目的:增殖重组质粒后,转染至人卵巢癌Ov-1063细胞。通过RNAi技术干扰Survivin基因表达,观察并探讨Survivin抑制后对Ov-1063细胞增殖及凋亡的变化。方法:1.增殖培养人卵巢癌Ov-1063细胞株,将重组质粒(pTZU6+1-shRNA-survivin)、阴性质粒(pTZU6+1)分别转染至细胞株。2.采用AO/EB法染色靶细胞株,观察细胞转染后三组细胞的凋亡率,并做统计学分析。3.用膜联蛋白V/PI(AnnexinV/PI)法染色Ov-1063细胞,采用流式细胞仪检测其凋亡情况。4.透射电镜观察Ov-1063细胞镜下形态改变。结果:1.采用AO/EB法染色靶细胞株24h后,实验组可见大量凋亡细胞及少量死亡细胞,空白组和阴性对照组大部分细胞为正常癌细胞。2.用AnnexinV/PI法染色转染细胞后,经流式细胞仪显示,转染24h后,实验组Ov-1063细胞凋亡率为(16.81±1.29)%,阴性对照组为(3.56±1.21)%,空白对照组为(2.79±1.43)%,3组实验数据相比较差异显著,(P<0.05)。3.转染24h后,在透射电镜观察下,可见实验组癌细胞出现凋亡小体,其余2组无明显凋亡改变。结论:重组质粒转染至实验组Ov-1063细胞后,细胞内的肿瘤表达基因Survivin受到有效抑制,从而诱导了癌细胞的凋亡。RNAi技术有可能应用于卵巢癌针对Survivin基因的靶向抑制治疗。
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