论文部分内容阅读
不育症是全球性的医学难题和社会问题,据统计世界范围内大约有10%~20%的已婚夫妇遭遇生育困难,而由于男性生殖能力异常所致的不育几近50%。男性不育与精子活力低下(弱精子症)、精子密度减少(少精子症)和精子形态异常(畸形精子症)有关,其中弱精子症是引起男性生育力低下和不育症的最主要因素。精子活力对于正常生育力的维持至关重要,但对于精子蛋白及其功能的基础研究却较为薄弱。蛋白质组学及技术是新世纪最具有价值的生命科学研究手段之一,它应用生物化学与分子生物学方法对蛋白质进行高效和大规模地分析,将其运用在精子蛋白差异表达和与不育症相互关系的研究后,已取得了令人振奋的成果。本研究课题旨在应用蛋白质组学技术开展特发性弱精子症患者与正常供精者的精子差异表达蛋白的比较研究,同时我们也试图运用该技术寻找调节精子活力的特异蛋白。首先通过病史采集、查体和计算机辅助的精液常规质量分析筛选出90例特发性弱精子症患者,并按照精子活动力分级将其分为轻度、中度、重度三组(每组各30例),正常供精者标本30例作为对照。然后抽提全精子蛋白质,运用SDS-PAGE电泳分离,并进行凝胶染色,初步分辨差异表达的蛋白条带。采用经典的未知蛋白鉴定路线,应用Western Blotting免疫印迹技术鉴定了差异蛋白DDX4,该蛋白是DExH/D蛋白家族重要成员VASA的人类同源体。结果显示各实验组之间DDX4蛋白的表达存在显著性差异(P<0.05),弱精子症患者该蛋白的表达明显少于正常对照组,这种差异表达提示DDX4与不育症关系密切。我们的研究结果表明DDX4对于精子发挥正常生理功能起到关键作用,它可以作为评估精子活力的高度特异性生物标记物。总之,本课题初步发现了正常供精者与特发性弱精子症患者精子之间存在一些差异表达的蛋白,为研究精子活力相关蛋白以及男性生育调节的分子机制奠定了良好的理论基础,并为进一步全面地应用蛋白质组学技术筛选、分离、鉴定精子蛋白提供了系统且详尽的研究方法,同时也为临床上由于弱精子症引起的不育的诊治寻找到了一些新的治疗思路和作用靶点。