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目的:对穿破石有效部位进行抗小鼠急性肝损伤和抗大鼠肝纤维化实验研究,为研究和开发穿破石治疗急慢性肝炎提供理论及实验依据。 方法:⑴实验药物的提取:采用经典的化学提取方法对穿破石进行提取;⑵穿破石水提取物和醇提取物急性毒性实验:急性毒性实验采用小鼠最大耐受量(MTD)灌胃法,观察一次性口服灌胃(i.g)给药后,连续观察14d,记录小鼠的毒性反应及死亡情况。⑶穿破石水提取物和醇提取物对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用实验:选用昆明小鼠,按体重随机分为,正常对照组、模型组、阳性对照药联苯双酯组(0.6g/kg)、穿破石水提取物和醇提取物高剂量组(6.50g/kg)、中剂量组(4.32g/kg)、低剂量组(2.16g/kg),每组雌雄各半。采用急性四氯化碳肝损伤模型,给予小鼠穿破石水提取物和醇提取物口服灌胃给药8d;除正常对照组外,其余各组小鼠腹腔注射(i.p)0.1%CCl4橄榄油溶液;16h后检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性;同时测定肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和总蛋白(TP)含量。⑷穿破石水提取物对四氯化碳致大鼠肝纤维化的治疗作用实验:选用SD大鼠,按体重随机分为,正常对照组、模型组、阳性对照药秋水仙碱组(0.00025g/kg)和穿破石水提取物高剂量组(4.57g/kg)、中剂量组(3.05g/kg)、低剂量组(1.52g/kg),每组雌雄各半。肝纤维化模型用40%CCl4橄榄油溶液3mL/kg大鼠背部皮下注射(s.c),每周2次,连续8周。实验开始时,除正常对照组外,其余各组大鼠背部皮下注射40%CCl4橄榄油溶液3mL/kg(首次为5mL/kg);造模同时,各给药组给药,8周后麻醉大鼠,腹主动脉取血,测定肝功能(ALT、AST、TP、ALB和GLOB)、血清一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)和肝纤维化指标透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ);取肝组织制备肝水解液,测定羟脯氨酸(HYP)水平,并取肝组织做病理检查。运用免疫组化方法检测大鼠肝组织中TGF-β1的表达,其阳性区域采用美国Image—Pro Plus专业图像分析软件进行定量分析。 结果:⑴采用经典的化学提取方法,得到穿破石水提取物和醇提取物。⑵穿破石水提取物急性毒性实验小鼠MTD>228.6g/kg。穿破石醇提取物急性毒性实验小鼠MTD>80g/kg。实验中,小鼠饮食和活动正常,毛色光泽,生长良好,未见任何中毒表现,无死亡。14d后处死小鼠,肉眼观察各器官均无异常。⑶小鼠急性肝损伤时,模型组血清ALT和AST活性明显增加,肝组织中MDA含量明显增加及SOD含量明显降低,与正常对照组比较差异有显著性(P<0.05);与模型组比较,穿破石水提取物和醇提取物治疗组可使血清ALT和AST活性明显降低(P<0.05);同时穿破石水提取物和醇提取物治疗组可使肝组织中MDA的含量明显降低(P<0.05),SOD含量明显增加(P<0.05),对TP的含量变化无影响(P>0.05)。⑷大鼠肝纤维化损伤时,模型组血清ALT和AST活性、血清AKP、HA、LN和CⅣ含量及肝组织HYP含量明显增加,而血清TP、ALB和SOD含量明显降低,与正常对照组比较差异有显著性(P<0.05);与模型组比较,穿破石水提取物治疗组可降低血清ALT和AST活性、血清PCⅢ和HA含量及肝组织HYP含量,而提高血清SOD、TP和ALB含量,差异均有显著性(P<0.05)。病理学检查结果显示,模型组肝细胞脂肪变性、坏死和肝纤维化程度明显增高,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05);穿破石水提取物治疗组能降低肝细胞脂肪变性、坏死和肝纤维化程度,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。免疫组织化学结果显示,模型组肝脏TGF-β1蛋白表达明显增高,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05);穿破石水提取物治疗组能降低肝脏TGF-β1蛋白表达,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。 结论:⑴穿破石水提取物和醇提取物对小鼠无急性毒性。⑵穿破石对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤具有保护作用,作用机制可能与其抗脂质过氧化有关。⑶穿破石水提取物对四氯化碳所致大鼠肝纤维化具有良好的治疗作用。实验结果为研究和开发穿破石治疗急慢性肝炎提供理论及实验依据。