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目的
1 以SD大鼠为研究对象,在前期成功制备大鼠自体血栓结合线栓阻塞大脑中动脉制备局灶性血栓栓塞性脑缺血模型的基础上,通过对大鼠脑缺血微血管损伤因素有关方面的研究,探讨脑缺血大鼠微血管损伤的病理生理特点。
2 通过测定大鼠脑组织内MMP-2、TIMP-1的表达及MMP-2活性水平变化,动态观察大鼠神经功能障碍、脑组织损伤,研究大黄苷元联合溶栓保护大鼠脑微血管损伤的作用机制。
3 通过延长溶栓治疗时间窗,减轻溶栓并发症,改善大鼠神经功能障碍、减轻脑水肿作用,评价大黄苷元联合溶栓对血栓性脑缺血大鼠脑微血管损伤的保护作用。
方法
1 190只 SD大鼠随机分为假手术组 10只、模型组、尿激酶溶栓组、大黄苷元组、溶栓联合大黄苷元组(联合组)各15只,制备血栓栓塞性脑缺血动物模型。除假手术组外,模型组和用药各组又分为缺血后 3h、6h、9h处理组,其中模型组(3h、6h、9h)经导管由颈内动脉给予生理盐水；溶栓组经导管区域动脉给予尿激酶(3h、6h、9h)；大黄苷元组(3h、6h、9h)为灌胃用药；溶栓联合大黄苷元组(3h、6h、9h)中尿激酶经导管区域动脉给药。模型组和假手术组分别灌胃和区域动脉给予同等体积的生理盐水；溶栓组分别于术前 4天直至取材给予生理盐水灌胃,术后3h、6h、9h区域动脉给予尿激酶,相对应的用药时间点灌胃生理盐水一次；大黄苷元组于造模前4天直至取材分别灌胃用药1次/d,相应的用药时间点区域动脉给予同溶栓组用药等体积的生理盐水。联合组用药灌胃药物及容积同大黄苷元组、区域动脉给药方式和剂量同溶栓组。
2 每只大鼠分别于术后3h、用药后3h、取材前0.5h(即用药后23.5h)三个时间点观察大鼠神经症状,取材。运用免疫组化、明胶酶谱技术比较各组大鼠脑组织MMP-2、TIMP-1的表达及MMP-2活性水平变化。
3 运用上述方法,从脑组织 MMP-2、TIMP-1的表达及MMP-2活性水平变化等方面,研究大黄苷元联合溶栓对血栓性脑缺血大鼠脑微血管损伤的保护作用。
结果
1 各组大鼠的神经症状评分和脑组织含水量变化比较及大黄苷元联合溶栓对其影响
1.1各组大鼠神经症状评分比较 模型组各时间点均较假手术组增高(P<0.01)；用药组各时间点均较相应时间模型组降低(P<0.05,P<0.01)；各组9h均较其3h和 6h 组增高(P<0.01,P<0.05)；联合用药 9h 组较溶栓组和大黄苷元组降低(P<0.05,P<0.01)。
1.2各组大鼠脑组织含水量比较 模型组各时间点均较假手术组增高(P<0.01)；溶栓组和联合组各时间点均较相应时间模型组降低(P<0.01)；除联合组9h与6h组无显著差异,余各组9h分别较其3h和6h组增高(P<0.01,P<0.05)；联合用药6h较溶栓组、各时间点较大黄苷元组降低(P<0.01,P<0.05)。
2各组大鼠脑组织MMP-2及TIMP-1表达变化比较及大黄苷元联合溶栓对其影响2.1 各组大鼠脑组织 MMP-2 表达变化比较 模型组各时间点 MMP-2 均较假手术组增强(P<0.01)；各溶栓组、联合组6h和9h MMP-2表达均较模型组增强,与溶栓组比较,大黄苷元和联合组各时间点 MMP-2表达减弱；联合组 6h和 9h的 MMP-2表达较大黄苷元组表达减弱(P<0.01,P<0.05)；模型组、溶栓组、大黄苷元 6h和9h组分别较其3h组及9h较6h组MMP-2表达增强(P<0.01,P<0.05)。
2.2 各组大鼠脑组织 TIMP-1 表达变化比较 模型组各时间点 TIMP-1 较假手术组增强(P<0.01)；各溶栓组和联合组、大黄苷元3h和6h组TIMP-1表达增强(P<0.01, P<0.05)；与溶栓组比较,联合组6h和9h的TIMP-1表达增强(P<0.01,P<0.05)；联合组6h和9h的TIMP-1和表达较大黄苷元组增强(P<0.01,P<0.05)；模型组、溶栓组、联合组 9h 分别较其 3h组的 TIMP-1 表达增强,联合组 6h较其 3h 组的TIMP-1表达明显增强(P<0.01,P<0.05)。
3 各组大鼠脑组织内MMP-2活性水平时程变化及大黄苷元联合溶栓对其影响
模型组各时间点 MMP-2 活性均较假手术组增强(P<0.01)；各溶栓组 MMP-2活性均较模型组增强(P<0.01,P<0.05)；溶栓组和模型组9h的MMP-2活性分别较其3h组增强(P<0.05),溶栓组9h较其6h组增强(P<0.05)；大黄苷元组、联合组较溶栓组减弱显著(P<0.01,P<0.05)。
结论
1 血栓性脑缺血大鼠脑缺血后,随着缺血时间的延长,神经功能障碍及脑水肿逐渐加重,有限时间内溶栓可减轻其神经功能障碍,但对减轻脑水肿无明显改变,这可能与溶栓导致MMP-2表达及活性功能紊乱有关。可能也是溶栓并发症发生的重要病理机制之一。
2 大黄苷元联合溶栓有延长溶栓治疗时间窗,改善血栓性脑缺血大鼠神经功能障碍,减轻脑水肿的作用,其作用机制可能与与下调 MMP-2 表达、减弱 MMP-2活性,及上调TIMP-1表达水平有关。
3 大黄苷元联合溶栓对血栓性脑缺血大鼠脑微血管损伤有明显的保护作用。