体外大鼠椎间盘器官模型的制备

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目的:椎间盘退变是慢性下腰痛的重要原因,如何在体外对其发病机制进行研究是目前研究的热点。我们整体培养包括上下软骨终板、纤维环及髓核组织的大鼠椎间盘器官,观察髓核组织的变化以及髓核细胞外基质主要成分的mRNA表达,探索一种椎间盘器官整体培养的实用技术并对其培养结果进行评价;方法:取SD大鼠90只,完整取出腰段椎间盘器官共400个,随机分为4组,置入12孔培养板内,配制高渗培养液渗透压为410mosm/kg,对椎间盘器官进行整体培养,在0,3,7,14天时间点取材并做为分组标准,用NBT和DAPI双重染色来观察髓核细胞成活率、HE、番红0染色观察组织完整性及Ⅱ型胶原免疫组化染色和Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白,核心蛋白聚糖,聚集蛋白聚糖mRNA表达情况观察基质变化情况。然后各组间再进行两两比较观察随着培养时间的延长椎间盘组织的变化情况;结果:体外培养两周的椎间盘大体组织形态、细胞存活率及髓核细胞外基质组织成分与新鲜离体椎间盘无统计学差异。由此可见:通过我们的培养方法可以在体外成功的培养椎间盘完整器官,并且可以保证两周内无明显变化;结论:我们参考Haschtmann实验方法建立鼠椎间盘整体培养模型的方法,利用高渗培养液可对椎间盘器官进行整体培养,为椎间盘的生理与病理的研究提供一种理想的模型。
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