原发性肝癌主要为肝细胞癌(HCC)，是最常见的严重威胁人们生命健康的恶性肿瘤之一。肝癌的病死率分列我国城市和农村癌症死亡率的第二位和第一位。目前，对其可能的发病病因有了初步的了解，但其发病机制尚未完全清楚, HBV、HCV感染是引起肝细胞肝癌的最重要的原因，饮酒、吸烟、家族史均被认为是发生肝癌的重要的危险因素。DNA修复损伤基因在维持基因遗传信息的稳定性方面具有重要作用，DNA修复通路的遗传性缺陷可能使基因的完整性遭遇破坏，使细胞向肿瘤细胞转变，DNA损伤修复基因单核苷酸多态性可以改变修复酶的结构和功能，进而影响基因的稳定性和肿瘤的发生。XRCC1及XPD基因是修复损伤基因， XRCC1主要参与基因碱基切除修复而XPD基因主要参与基因核苷酸切除修复，这些位点单个碱基的易变引起表达蛋白功能的改变，导致肿瘤的发生。本研究对于XRCC1-194、XRCC1-280及XPD-312三位点基因多态性进行分析，以期揭示其与肝癌易感性的关系。以甲胎蛋白为重要标志物的实验室检查结合影像技术对HCC的诊断已具备较完善的诊断体系，术前诊断与病理诊断符合率已达到97.4％。而目前关于肝癌预后主要依据术后病理分型、转移和复发等方面的指标进行判断，而这种对预后的判定往往也只有在进行外科手术、取得组织标本后方能进行。不同的肝癌患者其预后指标存在着差异性，而引起这种差异性的原因目前还知之甚少。巨噬细胞移动抑制因子(MIF)与许多肿瘤存在联系，甚至有的认为其可以作为相关肿瘤判断预后的一重要标志物。有研究表明MIF启动子基因多态性可能影响MIF的表达作用，影响肿瘤的预后。MIF启动子基因多态性与肝癌的预后是否存在关系，存在何种关系，目前尚无文献报道。目的：1.探讨DNA修复基因XRCC1及XPD基因多态性与HCC易感性的关系。2.以性别、年龄、HBV感染、吸烟、饮酒和家族史为发病危险因素条件下基因多态性对肝细胞癌发病的影响，进一步阐明XRCC1-194、XRCC1-280和XPD-312三位点多态性与中国汉族人肝癌发病风险的关系。3.分析HCC病人MIF－794启动子基因CATT微卫星多态现象与肝癌预后相关指标的联系，评价其在肝切除术预后判断的价值，期望为HCC预后判断提供可能。研究内容及方法：1、XRCC1及XPD基因单核苷酸多态性与肝细胞癌易感关系的研究采用以医院为基础的病例-对照研究方法。研究对象为来自同一地域的汉人群，病例组来自于2009.1-2010.12就治于大坪医院并经组织病理学确诊为HCC的患者，对照组为随机选择同一时期来自于同一地域在大坪医院进行健康体检的个体。1.1采集调查对象外周静脉血3－5ml于含有EDTA-K2的抗凝采血管中，编号后于－20℃冰箱保存。采用Tiangen生物科技有限公司血液基因组DNA提取试剂盒，按产品操作说明书提取血液标本基因组DNA。1.2应用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术及基因测序的方法进行基因型判定。1.3以χ2检验分析XRCC1Arg194Trp、XRCC1Arg280His和XPD Asp312Asn位点的基因型及等位基因分布频率在病例组和对照组中分布存在差异性的情况。以优势等位基因型(野生型纯合子)作为对照进行比较分析，以非条件Logistic回归分析法计算OR及其95%CI表示单个基因型与HCC发生风险之间的关联性以及XRCC1和XPD两个基因联合作用情况下与HCC发生风险之间的关联性。2、MIF启动子基因多态性对HCC预后的影响用于MIF启动子分析的HCC病人为2009.1月-2011.6月就治于大坪医院肝胆外科接受外科手术并经组织病理学确诊为肝细胞肝癌的患者，研究对象为经手术切除肝癌且无肿瘤远处转移的患者。调查对象术后进行电话回访，观察时间最长为36个月，最短为6个月。每3月进行B超或CT复查，了解有无肿瘤复发及转移。实验观察指标包括患者肿瘤的TNM分期、肿瘤病理学检测进行组织学分型、观察时间内的生存时间、肿瘤复发及转移时间(包括淋巴结的肿大和转移)。2.1采集调查对象外周静脉血3－5ml于含有EDTA-K2的抗凝采血管中，编号后于－20℃冰箱保存。采用tiangen生物科技有限公司血液基因组DNA提取试剂盒，按产品操作说明书提取血液标本基因组DNA。2.2应用双向基因测序方法检测MIF基因启动子-794CATT微卫星重复序列，进行基因型鉴定。3.3以ⅹ2检验分析比较5/5+5/6+6/6和7/X+8/X基因型之间肿瘤预后指标(肿瘤分化程度、TNM分期、生存率、复发及转移)，以T检验比较两组基因型平均生存时间的差异性。以上所有统计检验均为双侧概率检验,所有数据处理均采用SPSS13.0统计软件分析，P＜0.05为相差显著。结果：1、XRCC1及XPD基因单核苷酸多态性与肝细胞癌易感关系的研究1.1XRCC1194HCC组野生基因型(CC)为119例，杂合基因型(CT)为115例，突变纯合型(TT)为18例；XRCC1194健康对照组野生基因型(CC)为129例，杂合基因型(CT)为102例，突变纯合型(TT)为21例。非条件Logistic回归分析结果为OR﹦1.17，95%CI﹦(0.87-1.59)，P﹦0.42，表明XRCC1194位点突变等位基因型患肝癌的风险比野生纯合等位基因型高17％，但无统计学差异性。1.2XRCC1280HCC组野生基因型(GG)为193例，杂合基因型(GA)为53例，突变纯合型(AA)为6例；XRCC1280健康对照组野生基因型(GG)为207例，杂合基因型(GA)为40例，突变纯合型(AA)为5例。非条件Logistic回归分析结果为OR﹦1.41，95%CI﹦(0.96-2.06)，P﹦0.15，表明XRCC1280位点突变等位基因型患肝癌的风险比野生纯合等位基因型高41％，但无统计学差异。1.3XPD312肝癌组野生基因型(GG)为192例，杂合基因型(GA)为58例，突变纯合型(AA)为2例；XPD312健康对照组野生基因型(GG)为209例，杂合基因型(GA)为42例，突变纯合型(AA)为1例。非条件Logistic回归分析结果为:OR﹦1.56，95%CI﹦(1.51-2.37)，P﹦0.08，表明XPD312位点突变等位基因型患肝癌的风险是野生纯合等位基因型的1.56倍，但无统计学差异。1.4年龄大于等于50岁和小于50岁、性别为危险因素分层分析，结果显示该两基因3个多态位点分别与性别、年龄不存在交互作用，P值均大于0.05。1.5饮酒、吸烟、表面抗原携带及家族史为危险因素分层分析，结果显示：XRCC1-194Arg194Trp位点基因型的发生频率在病例组和对照组中均无显著性差别，但在暴露存在家族遗传因素条件下，XRCC1-194Trp基因型中，非条件Logistic回归分析结果为:OR﹦2.21，95%CI﹦(0.97-5.02)，P﹦0.15，HCC发生风险超过健康人的1.21倍，但P>0.05，无统计学意义。1.6饮酒、吸烟、表面抗原携带及家族史为危险因素分层分析，结果显示：XRCC1-280His增加HCC的发生，非条件Logistic回归分析结果分别为:OR﹦1.51，95%CI﹦(0.99-2.30)，P﹦0.10；OR﹦1.38，95%CI﹦(0.88-2.18)，P﹦0.15；OR﹦1.68，95%CI﹦(1.08-2.60)，P﹦0.04；OR﹦4.20，95%CI﹦(1.34-13.20)，P﹦0.03。虽然在暴露饮酒、吸烟条件下XRCC1-280His增加HCC的发生，但P值均大于0.05,结果无统计学意义，在HBV感染因素、肝癌家族史因素下，HCC的发生比健康人群多0.68倍和3.2倍，并且P值均小于0.05。1.7饮酒、吸烟、表面抗原携带及家族史为危险因素分层分析，结果显示：XRCC1-280His增加HCC的发生，非条件Logistic回归分析结果分别为:OR﹦1.67，95%CI﹦(1.10-2.60)，P﹦0.03；OR﹦1.87，95%CI﹦(1.18-2.96)，P﹦0.02；OR﹦1.96，95%CI﹦(1.24-3.10)，P﹦0.01；OR﹦3.40，95%CI﹦(1.32-8.76)，P﹦0.03。结果表明饮酒、吸烟、HBV感染因素、肝癌家族史四个因素均与XPD-312Asn存在交互作用，增加肝癌的发病风险，P值均小于0.05，有统计学意义。1.8包含XRCC1194Trp＋XRCC1280His，XRCC1194Trp＋XPD312Asn和XRCC1280His＋XPD312Asn等位基因的基因型增加HCC的发生，非条件Logistic回归分析结果分别为:OR﹦1.72，95%CI﹦(1.01-2.95)，P﹦0.10；OR﹦2.00，95%CI﹦(1.14-3.38)，P﹦0.04；OR﹦3.38，95%CI﹦(1.64-6.94)，P﹦0.00。2、MIF启动子基因多态性对HCC预后的影响2.1本组病例男性182例、女性59例，年龄范围为21－73，平均年龄为50.1±9.3岁。包含有5/5、5/6、5/7、5/8、6/6、6/7、6/8、7/7、7/8共九种MIF－794启动子基因CATT重复序列的基因型，其结果如下：MIF－794CATT5/5重复序列病例19例，平均生存时间20.61±7.97月，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为6、6、4、3例，组织标本高、中、低分化分别为4、6、9例，转移复发7例，死亡5例；5/6重复序列病例32例，平均生存时间19.97±8.09月，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为12、7、7、6例，组织标本高、中、低分化分别为4、15、13例，转移复发15例，死亡9例；5/7重复序列病例25例，平均生存时间16.16±7.36月，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为4、7、8、6例，组织标本高、中、低分化分别为2、6、17例，转移复发14例，死亡10例；5/8重复序列病例4例，平均生存时间19.25±8.77月，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为0、1、0、3例，组织标本高、中、低分化分别为1、0、3例，转移复发3例，死亡2例；6/6重复序列病例51例，平均生存时间18.86±7.40月，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为18、12、13、8例，组织标本高、中、低分化分别为4、21、26例，转移复发20例，死亡11例；6/7重复序列病例58例，平均生存时间15.36±6.28月，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为14、12、16、16例，组织标本高、中、低分化分别为2、8、48例，转移复发37例，死亡25例；6/8重复序列病例1例，生存时间21月，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为0、0、1、0、例，组织标本高、中、低分化分别为0、0、1例，转移复发1例，死亡1例；7/7重复序列病例25例，平均生存时间15.80±7.18月，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为8、3、7、7例，组织标本高、中、低分化分别为2、4、19，转移复发15例，死亡11例；7/8重复序列病例26例，平均生存时间14.85±6.69月，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为6、4、7、9例，组织标本高、中、低分化分别为2、5、19，转移复发16例，死亡11例。2.2MIF-794CATT按高重复序列和低重复序列分组进行比较分析(7/X+8/X、5/5+5/6+6/6)，分化程度、TNM分期、生存率、复发及转移、平均生存时间五个指标统计结果均存在差异性，p＜0.05,结果如下：(7/X+8/X)重复序列病例高中分化与低分化分别为32、107，(5/5+5/6+6/6)重复序列病例高中分化与低分化分别为54、48，P=0.000；(7/X+8/X)重复序列病例(Ⅰ+Ⅱ)期与(Ⅲ+Ⅳ)期分别为59、80，(5/5+5/6+6/6)重复序列病例(Ⅰ+Ⅱ)期与(Ⅲ+Ⅳ)期分别为61、41，P=0.008；(7/X+8/X)重复序列病例死亡人数与生存人数分别为60、79，(5/5+5/6+6/6)重复序列病例死亡人数与生存人数分别为25、77，P=0.003；(7/X+8/X)重复序列病例复发及转移人数分别为86、53，(5/5+5/6+6/6)重复序列病例复发及转移人数分别为42、60，P=0.002；(7/X+8/X)重复序列病例平均生存时间为15.73±7.68月，(5/5+5/6+6/6)重复序列病例平均生存时间为19.46±7.67月，P=0.000。结论：1.XRCC1-280His基因型为HBV表面抗原阳性、肝癌家族史人群易患HCC的高风险基因型。2.XPD-312Asn基因型为吸烟、饮酒、HBV阳性、有肝癌家族史人群易患肝癌高风险基因型。3.基因XRCC1-194Trp可能不是西南地区汉族人HCC的易感基因型。4.XRCC1-194Trp+XPD-312Asn、XRCC1-280His+XPD-312Asn两种基因型组合均能增加西南地区汉族人HCC的发生风险。5.MIF－794CATT5-8基因启动子低重复序列(5/5+5/6+6/6)基因型HCC患者预后较好，而高重复序列(7/X+8/X)基因型HCC预后较差。6.MIF－794CATT基因启动子微卫星重复序列多态性为HCC手术预后判断提供可能。