匍匐翦股颖(Agrostis stolonifera L.)是一种常见的多年生冷季型草坪草。它具有耐寒、耐盐、耐阴等优良特性。此外,其成坪速度快,质地良好,能够形成外观非常优美的草坪。因此广泛的应用在高尔夫球场,绿地网球场等。但由于其耐热性差,“夏枯”现象广泛存在,严重破坏了其草坪外观和质量,限制了其在气候温暖地区的广泛使用。而目前针对匍匐翦股颖耐热性机理以及对高温胁迫下的响应途径还尚不明确,因此这方面的研究成为了草坪研究者所关注的热点。本文在前人的研究基础上,通过RT-PCR的方法从匍匐翦股颖中克隆出三个小热激蛋白的编码基因AsHspl 7、AsHsp26.8和AsHsp26.7及其启动子,通过生物信息学分析,转基因技术等对其在植株对高温以及其他环境胁迫的响应中的功能与作用进行了深入的研究,其结论如下：1.从匍匐翦股颖中克隆出了小热激蛋白AsHsp17基因,其开放阅读框为456bp,编码151个氨基酸。对其进行生物信息学分析和亚细胞定位预测显示,AsHspl7含有一个典型的Hsp20结构域/a-crystallin结构域(ACD),并且属于细胞质Class I小热激蛋白亚家族。AsHsp17能够被高温胁迫强烈诱导,在根部也能够被盐胁迫或ABA处理所诱导。AsHsp17基因启动子中含有HSE等热胁迫相关的顺式元件。异源过表达AsHsp17能够通过改变一些光合作用相关基因的表达降低转基因拟南芥在正常条件下叶绿素含量和光合速率,也能够通过改变一些胁迫相关基因的表达使转基因拟南芥对于高温,盐和ABA处理更加敏感。2.应用RT-PCR技术从匍匐翦股颖中克隆了小热激蛋白AsHsp26.8的编码基因,其开放阅读框为732bp,编码243个氨基酸。其氨基酸序列中含有一个典型的Hsp23结构域／a-crystallin结构域(ACD)。该序列还包括一个叶绿体靶信号肽,一个甲硫氨酸富集区和两个保守区域。通过对其进行生物信息学分析和亚细胞定位预测显示AsHsp26.8属于叶绿体小热激蛋白。AsHsp26.8基因能够被高温胁迫强烈诱导,而其他环境胁迫均不能诱导AsHsp26.8基因的表达。对其启动子进行分析发现其含有HSE、AT-rich element和TATA等热胁迫相关的顺式元件。此外,GUS组织染色表明AsHsp26.8基因启动子能够被高温胁迫诱导激活。异源过表达AsHsp26.8能够使转基因拟南芥对高温,盐或ABA处理更为敏感。3.从匍匐翦股颖中克隆了小热激蛋白基因AsHsp26.7,其开放阅读框为729bp,编码242个氨基酸。其氨基酸序列中含有一个典型的Hsp23结构域/α-crystallin结构域(ACD)。该序列还包括一个叶绿体靶信号肽,一个甲硫氨酸富集区和两个保守区域。通过对其进行生物信息学分析和亚细胞定位预测显示AsHsp26.7属于叶绿体小热激蛋白。AsHsp26.7基因受高温胁迫的强烈诱导,并且在根部受干旱胁迫的诱导。对其启动子进行分析发现其含有HSE、AT-rich element和TATA等热胁迫相关的顺式元件。通过GUS组织染色发现AsHsp26.7基因启动子能够被高温胁迫所诱导激活,并且在花药、花粉粒和柱头中GUS的表达最为强烈。AsHsp26.7转基因拟南芥在高温条件下的存活率要高于野生型拟南芥。本研究对匍匐翦股颖三个小热激蛋白基因进行了表达模式和功能分析,为今后在匍匐翦股颖耐热性以及其它抗逆性方面的研究提供了依据。