组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠对变应性鼻炎预防作用的机制研究

来源 :空军军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hhf1985
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研究第一部分:丁酸钠对小鼠变应性鼻炎的预防作用
  目的:我们的既往研究发现:丁酸钠(SodiumButyrate,NaB)滴鼻给药对变应性鼻炎(AllergicRhinitis,AR)有治疗作用。丁酸盐是肠道膳食纤维的最终产物,广泛用于饲料添加从而增强断奶仔猪的肠道上皮屏障功能。变应性皮炎患者肠道丁酸盐水平降低。故而,我们推测:饲料长期添加NaB对变应性鼻炎有预防作用。
  方法:3周龄BALB/C小鼠90只,分为3组(每组30只):C(Control)组:空白对照组;AR组(OVA处理阳性对照组);NaB+AR组(NaB和OVA共同处理实验组)。C组和AR组采用正常饲料喂养,NaB+AR组饲料中添加NaB(30g/kg),喂养至6周龄。7周龄始选用OVA致敏AR小鼠模型:末次鼻腔激发后通过AR行为学评分,ELISA检测、westernblot、组织学观察等方法验证NaB对AR的预防作用。
  结果:1、AR组小鼠体重较NaB+AR组、C组减轻;NaB+AR组、C组之间无统学差异。小鼠血糖三组之间无统计学差异。2、NaB口服预防给药可以降低小鼠AR行为学评分,并且NaB+AR组鼻黏膜组织形态较AR组改善。3、NaB口服预防给药可以升高AR小鼠IL-2、IFN-r、IL-17的低表达,降低IL-4、IL-5、TGF-b1的高表达。4、NaB口服预防给药可以降低AR小鼠鼻黏膜组织HDAC1、HDAC8的高表达,升高乙酰化H3-ACK9的低表达。
  结论:1、NaB长期饲料添加喂养不影响小鼠的生长发育。2、NaB口服预防给药可以改善AR小鼠鼻黏膜形态,降低AR行为学评分。3、NaB口服预防给药可以恢复Thl/Th2/Th17和Treg平衡。4、NaB口服预防给药可以恢复HAT/HDAC平衡。5、NaB口服预防给药可以通过降低HDAC1、HDAC8的高表达,起到预防AR的作用。
  第二部分、丁酸钠预防性给药后小鼠鼻黏膜组织基因表达分析
  目的:AR是基因与环境相互作用而诱发的多因素疾病。组蛋白去乙酰化酶对染色体的结构修饰和基因表达调控发挥着重要的作用。长期给予组蛋白去乙酰化酶抑制剂NaB口服是否会引起小鼠鼻黏膜组织基因表达变化,也是我们需要探讨的内容。
  方法:选取C、AR、NaB+AR3组,每组各3个鼻黏膜样本,利用CapitalBioTechnologyMouseLncRNAArray,4x180K芯片,检测小鼠鼻黏膜组织基因表达谱变化。检测方法编号AG-GE-WL10-01-2010,数据分析方法编号AG-GE-DL00-01-2010。
  结果:1、LncRNAs和mRNAs聚类分析显示三组样本组内相关性好,组间差异大。2、三组间两两比较存在lncRNA、mRNA表达差异。3、筛选出三组间共同存在,并符合表达趋势的2个lncRNAs,33个mRNAs并且差异mRNA均为免疫球蛋白。经RT-PCR验证lncRNA(NONMMUT057309);mRNA:A-65-P07626,A-52-P50284,A-66-P10323,和A-55-P21872表达趋势与基因芯片结果相符。4、筛选出Top10Go-Terms,和PANTHER通路。5、构建lncRNA(NONMMUT057309)-mRNA共表达分析网络。7、预测lncRNA(NONMMUT057309)靶基因。
  结论:1、正常小鼠、AR小鼠和给予NaB预防给药的小鼠鼻黏膜组织间有lncRNAs、mRNAs表达差异。2、经RT-PCR验证lncRNA(NONMMUT057309)表达趋势与基因检测结果相符。3、LncRNA(NONMMUT057309)预测靶基因分别为Oct-1、Evi-1、和Pax-4。4、NaB口服预防给药通过降低HDAC1、HDAC8高表达,调节lncRNA(NONMMUT057309)表达,lncRNA(NONMMUT057309)通过调节靶基因(Oct-1、Evi-1、和Pax-4)预防AR的发病。
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